百令拮抗环孢素a肾毒性的研究.pptxVIP

百令拮抗环孢素A肾毒性的研究会计学第1页/共38页概 述随着器官移植手术的成熟和新型免疫抑制剂的开发,器官移植的早期成功率得到明显提高。CsA的应用使器官移植的急性排斥发生率明显降低,然而其毒性作用限制了它在慢性排斥中的长期应用,防治CsA毒性的药物学研究具有重要意义。第2页/共38页肾移植长期存活率 第一次尸肾移植的10年生存率Patient survival after first cadaver graft; all patients (reproduced by permission of the European Renal Association)欧洲肾病学会资料第3页/共38页肾移植长期存活率活体供肾与尸肾5年生存率比较 1984-2000年共1067例, 尸肾645例,活体肾422例, 免疫抑制剂:1984-1997年为 CsA + P + ZAZ(或无)方案 1997-2000年为 CsA + P + MMF. 美国Massachusetts General Hospital第4页/共38页Causes of graft loss over 10 years in CsA-treated patients 40% 27% 6% 3% 11% 5% 8%第5页/共38页CsA致慢性移植肾病的机制CsA 排异反应缺 血移植物损伤内皮细胞损伤血液动力学改变TGF-β1PDGFFGFA凝血高血压细胞外基质聚积 组织纤维化细胞增殖 慢性排异慢性移植性肾病第6页/共38页环孢霉素肾毒性的主要机理* 肾脏及全身的血管收缩* 内皮素的释放增加* NO的产生减少* TGF-?的表达增加第7页/共38页TGF-?1（Transforming growth factor ?1） 是导致慢性环孢素中毒及间质性纤维化的主要细胞因子 体内及体外实验均证实环孢霉素可以带来TGF-?1基因表 达?,环孢素的剂量与肾内TGF-?增加的程度成正比。 抗TGF-?1的抗体可以减轻或阻断TGF-?1的致纤维化作用（Khanna 1999） TGF-?拮抗剂（Pirfenidone ）可以保护肾脏免受环孢 素的毒性（Shihab2001）。TGF-?1的mRNA可以明显减少。 第8页/共38页以往的研究曾证实冬虫夏草能防治环孢A的肾毒性，促进小管上皮细胞增生，提高肌酐清除率，减轻肾小管的萎缩及空泡变性。J Nephrol Dialy Transplant 2003;9:322解放军肾脏病研究所 南京大学临床医学院第9页/共38页一、体外试验部分第10页/共38页研究内容1.百令对体外培养的肾小管上皮细胞3H掺入的影响；2.环孢霉素与百令对体外培养的肾小管上皮细胞周期的作用；3.环孢霉素对体外培养的血管内皮细胞TGF-β mRNA表达的影响。J Nephrol Dialy Transplant 2003;9:322解放军肾脏病研究所 第11页/共38页 1. 3H掺入结果****不同剂量（0.32~200 μg/ml )百令作用后肾小管细胞3H掺入量各组与对照组相比较 *第12页/共38页 1. 3H掺入结果 经过重复验证，得到相同的结果:百令200 μg/ml剂量组有非常显著的促进肾小管上皮细胞3H 掺入的作用;40μg/ml和8μg/ml有显著的促进3H 掺入的作用， 表明百令具有促进肾小管上皮细胞增殖的功能。第13页/共38页2.细胞周期作用的结果组别G2+M期(%)S期(%)对照组18.6 ±2.1528.6±1.1615 μg/mlCsA34.6 ±2.437.93 ±1.9615 μg/mlCsA＋5 μg/ml百令34.8 ±1.428.3 ±0.115 μg/mlCsA＋10 μg/ml百令34.0 ±2.128.87 ±0.4215 μg/mlCsA＋50 μg/ml百令30.4 ±3.75*15.2 ±4.76*15 μg/mlCsA＋100 μg/ml百令32.9 ±2.78*12.4 ±1.96** 15 μg/ml环孢霉素和不同剂量百令对HKC细胞周期的作用 *:P0.05, **:P0.01 versus CsA组第14页/共38页2. 细胞周期作用的结果15μg/mlCsA作用24小时对HKC细胞周期有非常明显的影响，与对照组相比G2/M期细胞比例明显上升，S期细胞显著减少（t检验P值均0.01)。 15μg/mlCsA＋50μg/ml百令组及15μg/mlCsA＋100μg/ml百令组作用24小时与CsA组相比较S期 细胞比例上升，G2/M期细胞比例下降,差异显著。第15页/共38页3.环孢霉素对体外培养的血管内皮细胞TGF-β mRNA表达的影响 大鼠动物模型研究发现，CsA诱导的血管病变可能与TGF-β 的