奶山羊养殖技术规范 第3部分：双基因良种选育.pdf

DB61/T 1521.3—2021 奶山羊养殖技术规范 第3部分：双基因良种选育 1 范围 本部分规定了高产良种奶山羊选育方法、选育程序内容要求。 本部分适用于以催乳素受体和促黄体素beta亚基基因选育关中奶山羊、莎能奶山羊等良种奶山羊。 2 规范性引用文件 本部分无规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本部分。 3.1 基因 gene 位于细胞染色体上具有遗传效应的DNA片段，是调控生物性状的基本遗传单位。 3.2 催乳素 prolactin 为动物垂体分泌的一种蛋白质激素，由199 个氨基酸残基组成。 3.3 受体 receptor 可与细胞外专一信号分子 （配体）结合引起细胞反应的蛋白质，分为细胞表面受体和细胞内受体。 3.4 催乳素受体 prolactin receptor 催乳素受体位于山羊的16号染色体上，分为长受体(LF) 、中受体(IF) 及短受体( SF1a 及 SF1b) 。 不同催乳素受体由同一基因编码，经转录后选择性剪接而生成。PRLR是调控山羊产奶性能和产羔性能 的重要候选基因。 4 选育方法 4.1 筛选高产个体 筛选头胎产羔数达到2 只以上的奶山羊，以及产奶第3个月日均产奶量达到4kg以上的高产个体作 为功能基因检测的对象。 1 DB61/T 1521.3—2021 4.2 检测高产个体基因型 采用基因测序的方法对高产个体中的催乳素受体基因 （PRLR）和促黄体素beta 亚基 （LHβ）基因 进行基因分型。 5 选择程序 5.1 血液采集 从山羊的颈静脉采取1mL的血样或从耳部采取0.5g的耳组织。 5.2 DNA 提取 利用DNA提取试剂盒从血液或耳组织中提取基因组DNA。 5.3 扩增目的片段 根据催乳素受体基因 （PRLR）和促黄体素beta 亚基 （LHβ）基因的DNA序列分别设计扩增PRLR 基因外显子9和LHβ基因5′非翻译区的特异引物 （附录A）。 5.4 检测目的片段 利用2 %的琼脂糖凝胶电泳检测扩增的目的片段。 5.5 DNA测序 利用DNA测序技术检测基因的分型和统计不同个体的基因型。 5.6 基因型选配 从5.5中检测的个体中筛选具有催乳素受体基因 （PRLR）的GG基因型以及促黄体素beta 亚基 （LHβ ）基因的CC基因型的优秀个体进行杂交或者选同交配。 5.7 基因型的横交固定 在不同基因型杂交后代中筛选同时具有GG和CC基因型的个体进行横交固定。 5.8 纯合基因型个体组群 在横交固定的个体中检测和筛选基因型聚合纯化在一起的个体组群。 5.9 稳定基因型 采用基因型选同交配的方法稳定基因型，从而形成产羔率和产奶量高的奶山羊核心群。 5.10 选育高产奶山羊新品种 （系） 对含有以上2 个基因型的个体进行遗传稳定性和生产性能稳定性的检测，结合常规育种方法，选育 出高产奶山羊新品系或新品种。 A 2 DB61/T 1521.3—2021 附 录 A （资料性） 扩充特异引物 A.1 双基因型聚合育种技术用的分子生物学技术 聚合酶链式反应 （PCR），DNA测序，基因克隆，琼脂糖凝胶电泳。 A.2 双基因型聚合育种技术用统计方法 多因素方差分析和线性回归模型。 A.3 双基因型聚合育种技术所需仪器设备 PCR扩增仪 （可设定温度梯度）； 电子天平 （精度为0.0001g）； 常温高速离心机 （最大转速为15300rpm）； 低温冷冻离心机 （能设定为4 ℃）； 移液器 （通用标准吸头有6个规格:10ul、20ul