DNA和蛋白质技术.pptxVIP

会计学; ;基础自主梳理;3．实验操作 (1)样品处理：通过红细胞的洗涤、搅拌、离心等操作收集到血红蛋白溶液。 (2)粗分离：通过透析去除血红蛋白溶液中的_______________较小的杂质。 (3)纯化：通过______________分离相对分子质量不同的蛋白质。 (4)纯度鉴定：用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳进行样品纯度鉴定。;二、PCR技术扩增DNA片段 1．PCR技术 (1)PCR：_______________的简称，是一种体外迅速扩增____________的技术。 (2)扩增方向：总是从子链的5′端向__端延伸。 (3)引物特点：是一小段______或DNA，能与DNA母链的一段碱基序列互补配对，用于PCR的引物长度通常为________个核苷酸。 (4)原理：DNA复制原理。 (5)条件：DNA模板、分别与两条模板链相结合的两种________，四种脱氧核苷酸、耐热的_______________，同时控制温度。;2．过程 (1)变性：当温度上升到________以上时，双链DNA解旋为单链。 (2)复性：温度下降为50 ℃左右时，两种______通过碱基互补配对与_______________结合。 (3)延伸：当温度上升到72 ℃左右时，四种脱氧核苷酸在___________的作用下，根据_____________原则合成新的DNA链。 3．结果：DNA聚合酶只能特异性地复制处于___________________序列，使这段固定长度的序列呈_______扩增。;高频考点突破;科目一考试网 科目一模拟考试2016;2．方法目的;(1)实验过程中两次用到蒸馏水，第一次目的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出DNA，第二次目的是稀释NaCl溶液，使DNA从溶液中析出。 (2)预冷的酒精溶液具有以下优点 ①抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解。 ②降低分子运动易于形成沉淀析出。 ③低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂。 【易误警示】　本实验用鸡血细胞作实验材料，不能用哺乳动物的成熟红细胞，原因是哺乳动物的成熟红细胞内无细胞核，但它可以作为血红蛋白提取和制备细胞膜的理想材料。;即时应用(随学随练，轻松夺冠) 1．在“DNA的粗提取与鉴定”实验中，将提取获得的DNA的黏稠物(还含有许多杂质)分别处理如下： 第一，放入0.14 mol/L的NaCl溶液中，搅拌后过滤，得滤液A和黏稠物a。 第二，放入2 mol/L的NaCl溶液中，搅拌后过滤，得滤液B和黏稠物b。 第三，放入冷却的95%的酒精溶液中，搅拌后过滤，得滤液C和黏稠物c。 以上过程获得的滤液和黏稠物中，因含DNA少而可以丢弃的是____________________________________。;解析：在不同浓度的NaCl溶液中，DNA的溶解度不同。在0.14 mol/L的NaCl溶液中DNA溶解度最小，DNA析出，呈丝状物，过滤后存在于黏稠物a中；在2 mol/L的NaCl溶液中DNA溶解度最大，所以DNA溶解，过滤后存在于滤液B中；酒精可使DNA分子凝集，因此，在冷却的95%的酒精溶液中DNA凝集，呈丝状物，过滤后存在于黏稠物c中。 答案：A、b、C;考点二;【拓展深化】　①引物是指能够与DNA母链的一段碱基序列互补配对的一小段DNA或RNA。 ②DNA聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。;即时应用(随学随练，轻松夺冠) 2．PCR利用了DNA热变性的原理，PCR仪实际上也是一种能自动调控温度的仪器。对PCR过程中“温度的控制”的下列说法错误的是(　　) A．酶促反应需要高的温度，是为了确保模板的单链 B．延伸的温度必须大于复性温度，而小于变性温度 C．DNA聚合酶不能热变性，要用耐高温的聚合酶 D．DNA解旋酶不能热变性，为了确保模板是单链;解析：选D。PCR是一种体外DNA扩增技术。DNA双链的解开不需要解旋酶，靠高温使其变性，双螺旋结构解体，双链分开；复性前，在耐高温的DNA聚合酶的作用下根据碱基互补配对原则合成新的DNA，因此延伸的温度要大于复性温度，小于变性温度。;考点三;2.实验操作程序 (1)样品处理 ①红细胞的洗涤：除去杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化； ②血红蛋白的释放：使红细胞破裂，血红蛋白释放出来； ③分离血红蛋白溶液：经过离心使血红蛋白和其他杂质分离开来，便于下一步对血红蛋白的纯化。;(2)粗分离——透析：除去样品中相对分子质量较小的杂质。 (3)纯化：一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化。 (4)纯度鉴定：一般用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法来测定蛋白质的分子量，即对血红蛋白进行纯度鉴定。 【易误警示】　相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入