微生物大小与数量的测定实验报告.pdf

. 山东大学实验报告 2017 年 11 月 27 日 ________________________________________ _________________________ 科 目：微生物学实验 题 目：微生物大小与数量的测定 姓 名：丁志康 一、 目的要求 1. 学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。 2. 增强微生物细胞大小的感性认识。 3. 明确血细胞计数板计数的原理。 4. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。 二、基本原理 一）微生物大小的测定 1.微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定， 需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。 2.镜台测微尺是中央部分可有精确等分线的载玻片，一般是将 1mm 等分为 100 格每格长 0.01mm （即10µm）。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于矫正目镜测微尺每格的相对 长度。 3. 目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有等分为50 小格 和 100 小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物 象。由于不 同显微镜或不 同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格所代表 的实际 长度也不一样。因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求 出该显微镜在一定大放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表 的相对长度。然后根 精选 . 据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。 精选 . 4.球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。如金黄色葡萄球菌直径约为0.8µm， 枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3µm。 二）微生物数量的测定 1.微生物数量的测定有多种方法，本次试验中使用显微镜直接计数法。显微镜直接计数法是将少 量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌器)，于显微镜下 直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、 Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计 数，基本原理相同。后两种计菌器由于盖上盖玻片后，总容积为0.02mm ，而且盖玻片和载波片3 之间的距离只有 0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。（除了用这 些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法，此法一般用于牛乳 直观、快速、操作简单 所测得的 的细菌学检查。)显微镜直接计数法的优点是 。但此法的缺点是 结果通常是死菌体和活菌体的总和 。目前已有一些方法可以克服这一缺点，如结合活菌染色微 室培养（短时间）以及加细胞分裂抑制剂等方法来达到只计数活菌体的目的。本实验以血球计 数板为例进行显微镜直接计数。 2.用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。该计数板是一块特制的载 玻片，其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上 3.各列有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，中间的大方格即为计数室。计数室的刻度 一般有两种规格，一种是一个大方格分成25 个中方格，而每个中方格又分成 16 个小方格；另 一种是一个大方格分成 16 个中方格，而每个中方格又分成