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会计学;注意上课时间，保证出勤率
实验室仪器使用规范（移液器、离心机等），损坏赔偿
实验：分组、试剂、实验讲义
实验安全，仪器、试剂、菌液
5. 考试：实验40％（操作＋报告）
闭卷60％
6. 值日
;DAY 1:;;实验内容;总体实验安排;DH5a感受态细胞的制备：P159
转种（1：40）
继续振荡培养2.5h
制备感受态细胞（CaCl2)
连接反应终止
转化，涂板，37度过夜培养
（DH5α：感受态一块LB,感受态一块LK 转化菌一块LK, BL21同样）;DAY 3:;DAY 4:; 转种（1：40）
培养3h，加入IPTG诱导
不同时间取菌0h1h、2h、3h取菌
电泳;Question：;Discovery of the Double Helix;;常用分子生物学技术;Why gene Cloning?;Basic procedure
of DNA cloning;
基因克隆(gene cloning):是指采用人工方法将目的基因与载体DNA在体外进行重组，并将重组后的DNA引入宿主细胞中进行扩增或表达的过程。 ;基因工程的操作过程;One component of the bacterial restriction-modification system.
Restriction endonuclease:
1) recognize short, symmetrical DNA sequence;
2) cut DNA backbone at a specific site within that sequence (kill foreign DNA).
Mythylase: methylates C or A of the cellular DNA ;Recognition sequences;Restriction sequences;Isoschizomers/同功异源酶:来源不同，但能识别和切割同一位点，这些酶称～。;Isoaudamers/同尾酶：识别序列不同，但能产生相同的粘性末端的酶;
自我复制能力；
易于从宿主细胞分离；
多克隆位点；
选择标记。;vectors;1 Plasmid vectors
2 Bacteriophage vectors
3 Virus
4 Cosmids and YACs ;第26页/共113页;Multiple cloning sites;Bacteriophage vector;λ phage; Viruses that can infect bacteria.
48.5 kb in length
Linear or circular genome (cos ends); 5‘-CGGGGCGGCGACCTCG-3’
3’-GCCCCGCCGCTGGAGC-5’
Cleavage Ligation
(during packaging) (after infection)
GGGCGGGCGACCTCG-3’
5’-CG + GC-5’
3’-GCCCCGCCGCTGGA;Cosmids and YACs;Digestion;Essential components of YAC vectors :
Centromere (CEN着丝粒),
telomere (TEL端粒)
autonomous replicating sequence (ARS)
ampr and markers such as TRP1 and URA3.
Recognition sites of restriction enzymes;Yeast selection;载体种类：;1.acquiring target gene
1) screening from genomic library;
2) screening from cDNA library;
3) by PCR
4) Chemical synthesis;
2. vector selection
3. ligation;? 1) cohesive end ligation
2) blunt end ligation
3) through linker(人工接头）
4) adding homopolymeric tail（同聚物加尾
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