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会计学;不依赖连接反应的克隆方法（LIC）;Function of T7 Polymerase;pET载体;抗生素抗性; 用于克隆的宿主菌;用于表达的宿主菌;BL21(DE3);应该注意一些带有T7启动子的商业载体原则上可以用来表达，然而，只有T7启动子而没有额外的lac阻遏子基因的载体并不适合。这些载体上的多拷贝lac操纵 子（用于蓝白斑筛选）会结合lac抑制因子，使pet菌株中同样受lac抑制因子控制的基因部分表达。。结果基本的T7RNA聚合酶活性升高，使目的基因的稳定性受到影响。;lacUV5 Promoter;T7lac Promoter;pLysS和pLysE宿主菌;pLysS (or pLysE）有助于目的蛋白的抽提;载体与宿主共同影响表达水平;The pET System Process;PCR法制备插入片段有引入突变的风险，可以采用以下方法降低PCR反应的突变：
采用高保真的酶
减少循环数
增加模板浓度
增加引物浓度;片段与载体连接;;表达宿主菌的诱导;准备诱导表达;另一种诱导方法;诱导的步骤;优化表达条件;;优化表达条件;优化表达条件;优化表达条件;优化表达条件;影响目标蛋白稳定性的N端原则;有时除了全长目的蛋白还会发现未完全表达的截短蛋白，一个显见的解释就是蛋白降解，而次翻译起始位点是另一种可能。若一个类似核糖体结合位点（AAGGAAG）的序列加上适当的间隔序列（一般是5-13个核苷酸），位于AUG密码子上游，会发生上述情况。一个可能的解决方法是采用pET载体，可以在两端都有融合标签。;其他影响表达水平的因素
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