高效液相色谱法测定饮料中咖啡因的含量.pptVIP

*/9 在线答疑： wy- 大 学 通 用 化 学 实 验 技 术 高效液相色谱法测定饮料中咖啡因的含量 实验102 高效液相色谱法测定饮料中咖啡因的含量 102.1 实验目的 (1) 掌握用高效液相色谱法测定饮料中咖啡因的方法。 (2) 掌握采用高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法。 第一页，共十页。 102.2 实验原理 　　咖啡因又称咖啡碱，属黄嘌呤衍生物，化学名称为l,3,7-三甲基黄嘌呤，是由茶叶或咖啡中提取而得的一种生物碱。它能兴奋大脑皮层，使人精神兴奋。咖啡中含咖啡因约为l.2%～1.8%，茶叶中约为2.0%～4.7%。可乐饮料、APC药片均含咖啡因。其分子式为C8H10O2N4,结构式为： 第二页，共十页。 定量测定咖啡因的传统分析方法是采用萃取分光光度法。用反相高效液相色谱法将饮料中的咖啡因与其他组分（如：单丁酸、咖啡酸、蔗糖等）分离后，将已配制的浓度不同的咖啡因标准溶液也注入色谱系统。如流速和泵的压力在整个实验过程中是恒定的，测定它们在色谱图上的保留时间tR（或保留距离）或峰面积A后，可直接用tR定性，用峰面积作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定饮料中的咖啡因含量。 第三页，共十页。 102.3 操作流程 1．标准储备液的配制：准确称取25.0 mg咖啡因标准试剂，用配制的流动相溶解，转入100 mL容量瓶中，稀释至刻度。 2．用标准储备液配制质量浓度分别为25 ?g/mL，50 ?g/mL，75 ?g/mL，100 ?g/mL，125 ?g/mL系列标准溶液。 3．启动泵，打开检测器，设置泵的流速为2.3 mL/mm，检测器的灵敏度设在0.08 AUFS，打开记录仪，将纸速设在1 cm/min。当流动相通过色谱柱约5～10 min．记录仪上基线稳定后，开始进样。 4．将进样阀放在半截（LOAD）位时，用注射器取25 ?L浓度最低的标准样（比进佯阀上定量管多5 ?L以上)，注入进样阀中。 第四页，共十页。 　　5．将进样阀从装载（LOAD）位转向进样（1NJECT0位，同时按标记钮(MARKER)，使在记录纸上打开进样信号。 　　6．当咖啡因的色谱峰出完后，按照步骤4～5连续操作2次，使最低浓度的标准试液获得3张色谱图。 　　7．按标准试液浓度增加的顺序，按步骤4～6操作，使每一种标准样获得3个数据。 　　8．取2 mL咖啡饮料试液放入25 mL容量瓶中（或取5 mL茶液放入50 mL容量瓶中），分别用流动相稀释至刻度。 　　9．按步骤4～6操作，分析饮料试液（咖啡或茶）。 第五页，共十页。 102.4 注意事项 （1）钢瓶的工作压力，一定要控制在所规定范围内，不得超压工作。必须切记，保障安全。 （2）实验结束后，检查仪器是否正常，关闭是否正确。 第六页，共十页。 102.5 问题讨论 （1）解释用反相柱n-C18测定咖啡因的原理。 （2）在色谱分析中为什么常采用相对校正因子fi？ 第七页，共十页。 （1）解释用反相柱n-C18测定咖啡因的原理。 答：反相柱n-C18,是将非极性物质n-C18烷（正构烷烃）键合到硅胶基质上，分离过程中以极性溶剂为流动相，实现弱极性化合物的分离。与其他组分（如：单丁酸、咖啡酸、蔗糖等）相比，咖啡因为弱极性化合物。 102.6 参考答案? 第八页，共十页。 答：试样中各组分经色谱柱分离后进入检测器，在一定操作条件下，被测组分的质量m（或浓度c）与检测器响应讯号（色谱峰的峰高h或峰面积A）成正比，即m = f′A 。这是色谱分析定量的依据。式中的f被称为绝对校正因子。由于同一检测器对不同的组分响应值不一样，即同样的量在检测器中产生信号大小（峰高h或峰面积A）不同，为了使检测器产生的信号能真实地反应出物质的含量，需要对响应值进行校正，这就是校正因子的意义。由于校正因子f′与色谱操作条件有密切关系，不易准确测定（不是一个定植），因此，在色谱分析中采用相对校正因子fi，既被测物质i和标准物质s绝对校正因子的比。 （2）在色谱分析中为什么常采用相对校正因子fi？ 第九页，共十页。 内容总结 实验102 高效液相色谱法测定饮料中咖啡因的含量。1．标准储备液的配制：准确称取25.0 mg咖啡因标准试剂，用配制的流动相溶解，转入100 mL容量瓶中，稀释至刻度。5．将进样阀从装载（LOAD）位转向进样（1NJECT0位，同时按标记钮(MARKER)，使在记录纸上打开进样信号。7．按标准试液浓度增加的顺序，按步骤4～6操作，使每一种标准样获得3个数据。（1）钢瓶的工作压力，一定要控制在所规定范围内，不得超压工作。（2）实验结束后，检查仪器是否正常，关闭是否正确。