实验四微生物菌落的观察和细菌的运动观察.pptxVIP

实验四微生物菌落的观察和细菌的运动观察会计学第1页/共19页目 的 要 求学会观察、识别各种不同的微生物菌落的方法。 掌握平板菌落计数的方法，运用所学的知识详细的描述所分离平板上的各种微生物菌落。了解普通光学显微镜的构造和原理，熟悉其使用的正确方法。 学习并掌握油镜的使用方法，学会用压滴法或悬滴法观察细菌运动性的基本技术。第2页/共19页实 验 原 理微生物类别菌落特征单细胞微生物菌丝状微生物细菌酵母菌放线菌霉菌主要特征细胞形态特征小而均匀个别有芽孢大而分化细而均匀粗而分化相互关系单个分散或按一定方式排列单个分散或假丝状丝状交织丝状交织菌落含水情况很湿或较湿较湿干燥或较干燥干燥外观特征小而突起或大而平坦大而突起小而紧密大而疏松或大而致密参考特征菌落透明度透明或稍透明稍透明不透明不透明菌落与培养基结合度不结合不结合牢固结合较牢固结合菌落的颜色多样单调十分多样十分多样菌落正反面颜色差别相同相同一般不同一般不同细胞生长速度一般很快较快慢一般较快气味一般有臭味多带酒香常有泥腥味霉味 对于一些难区别的菌落还应该借助显微镜来观察其细胞形态以进一步做出正确的判断。第3页/共19页（一）普通光学显微镜的构造： 1、机械部分：镜臂、镜座、粗调节器、细调节器、聚光升降螺旋、载物台等。---支持、调节、固定等作用 2、光学系统：接物镜、接目镜、照明装置、聚光器等。 1. 物镜转换器 2. 接物镜 3.游标卡尺 4.载物台 5.聚光器 6. 彩虹光阑7.光源8. 镜座9. 电源开关10. 光源滑动变阻器11. 粗调螺旋12. 微调螺旋 13. 镜臂 14.镜筒 15.目镜 16.标本移动螺旋第4页/共19页 显微镜的放大倍数和分辨率 1. 放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率 是表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力。第5页/共19页显微镜的分辨率可用公式表示为：D=λ/2NA =λ/2nsin(α/2 )D：物镜分辨出物体两点间的最短距离；NA，数值孔径，是物镜的参数之一 ； ?：入射光的波长（可见光平均0.55?m)n: 物镜和被检标本间介质的折射率；（空气为1.0，水为1.33，玻璃为1.5，甘油为1.47，香柏油为1.52。） ?：镜口角（即入射角）：是指从物镜光轴上的物点发出的光线与物镜前透镜有效直径的边缘所张的角度 。比如，肉眼所能感受的光波平均长度为0.55μm，假如NA=0.65的接物镜，它的分辨力D=?*0.55/0.65=0.42μm以下的两点间的距离就分辨不出来了，即使使用倍数更大的接目镜使其总放大率增加也仍分辨不出，只有改用数值孔径更大的接物镜才行。 第6页/共19页（二）油镜的使用原理油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。 加入中间的介质是一层香柏油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。第7页/共19页实 验 材 料实验三所作的平板培养物：A，在细菌培养基上生长的各种菌落；B，在霉菌培养基上生长的各种菌落。 实验二所作的试管斜面，酒精灯、接种环等。盖玻片、凹玻片、接种环、酒精灯。菌种：大肠杆菌E.coli，枯草杆菌B.subtilis或实验三所培养菌种第8页/共19页实 验 程 序Ⅰ（观察描述菌落特征）运用所掌握的各种微生物菌落的特点，观察、识别、描述所做样品的两个平板上的所有菌落,并将结果填入表1中。常用的菌落描述词语：大小：大、中、小、针尖状形状：圆形、隆起、扁平、假根状、不规则状等；边缘情况： 整齐、波形、裂叶状、锯齿状等表面情况： 干燥、湿润、光滑、皱褶、颗粒状、龟裂状等；第9页/共19页表1平板菌落特征描述样品来源培养基类型菌落类型特征描述菌落数（近似值）大小形状颜色表面情况边缘情况 A1A2B3B4 A1A2B3B4第10页/共19页实 验 程 序Ⅱ（平板菌落计数）定义:根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征而设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。 对土壤中的微生物进行计数,将结果填入表2中。第11页/共19页表2土壤中微生物计数结果 稀释度10-510-61g样品活菌数12平均12平均细菌菌落数霉菌菌落数计算结果时，常按下列标准从接种后的2个或3个稀释度中选择一个合适的稀释度，求出每克菌剂中的含菌数。? （1）同一稀释度各个重复的菌数相差不太悬殊。? （2）细菌、放线菌、酵母菌以每皿30—300个菌落为宜，霉菌以每皿10—100个菌落为宜。选择好计数的稀释度后，即可统