PCR实验室建造知识与造价估算.pdf

PCR 实验室建造知识与造价估算 PCR 实验室又叫基因扩增实验室，PCR 是聚合酶链式反应(PolymeraseChain Reaction)的简称。是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA 片段，可看作 生物体外的特殊 DNA 复制。通过 DNA 基因追踪系统，能迅速掌握患者体内的病毒 含量，其精确度高达纳米级别，精确检测乙肝病毒在患者体内存在的数量、是否 复制、是否传染、传染性有多强、是否必要服药、肝功能有否异常改变能及时判 断病人最适合使用哪类抗病毒药物、判断药物疗效如何、给临床治疗提供了可靠 的检验依据。 PCR 是分子生物学研究和实验的常规方法，广泛应用于生物学各个领域，例 如：艾滋病检测、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的检测和诊断，DNA 指纹、个体识 别、亲子鉴定及法医物证，动、植物检疫，动物及其衍生产品检测，动物饲料、 化妆品、食品卫生检测，转基因作物与转基因微生物检测等。 平均每 1~2 年发生一次传染病重大疫情，如 2003 年的重症急性呼吸综合征 （SARS 冠状病毒），2005 年的禽流感病毒 （HSN1 禽流感病毒）, 2008 年的手足 口（肠道病毒），2011 年的发热伴血小板综合征（新布尼亚病毒），2013 年的 流感病毒 （H7N9 病毒），2014 年的禽流感（H10N8 病毒）和埃博拉病毒，2015 年禽流感病毒（H5N6 病毒），2016 年的塞卡病毒，以及目前的新型冠状病毒肺 炎（COVID-19 病毒）。疫情爆发突出表现为发病急、进展快、传染性强，因而 传染病病原体的快速、准确鉴定，成控制疫情关键因素。此类疾病的诊断大部分 是通过核酸扩增的方式来实现检测的，而该过程均需要在高标准的 PCR 实验室中 由专业人士操作完成，因而PCR 实验室在传染病重大疫情防控中的疾病诊断和服 务成为不可或缺的力量。除了病毒类传染病，PCR 实验室可开展的病原微生物检 测包括细菌类、真菌类以及原生动物等疾病的诊断，如临床常见的巨细胞病毒、 EB 病毒、结核分枝杆菌、甲乙型流感病毒肺炎、支原体及衣原体感染、乙肝、 丙肝、戊肝等，PCR 实验室在疾病诊断和控制中起到极为重要的作用。 标准的 PCR 实验室分为四个区域:试剂贮存和准备区、样品处理区、核酸扩 增区、产物分析区。为避免交叉污染,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向 进行,即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩増反应混合物配制和扩增区 →扩增产物分析区各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。 PCR 实验室可以是分散形式，也可以是组合形式。完成一组 PCR 实验，通常 应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程。 1、分散形式 PCR 实验室： 所谓分散形式 PCR 实验室，是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较 远，呈分散布置形式。对于这种布置形式的 PCR 验室，由于各个实验之间不易相 互干扰，因此无需特殊条件要求。 2、组合形式 PCR 实验室： 所谓组合形式PCR 实验室,是指完成PCR 四个实验过程的实验用房相邻布置， 组成独立实验区域的形式。对于组合形式 PCR 实验室，由于各个实验间集中布置， 容易造成相互干扰，因此，对总体布局以及屏障系统具有一定的要求。各室在入 口处设缓冲间，以减少室内外空气交换。 PCR 实验室主要功能 1、试剂储存和准备区的功能是： 贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头 等消耗品的贮存和准备。贮存试剂和用于标本制备的消耗品等材料应当直接运送 至试剂贮存和准备区，不能经过扩增检测区，试剂盒中的阳性对照品及质控品不 应当保存在该区，应当保存在标本处理区。 2、标本制备区的功能是： 核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的操 作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。由于在 样本混合、核酸纯化过程中可能会发生气溶胶所致的污染，可通过在本区内设立 正压条件，避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。为避免样本间的交叉污染，加 入待测核酸后，必须盖好含反应混合液的反应管。对具有潜在传染危险性的材料， 必须在生物安全柜内开盖，并有明确的样本处理和灭活程序。 3、核酸扩增区的功能是： DNA 合成、DNA 扩增及检测。为避免气溶胶所致的污染，应当尽量减少在本 区内的走动。必须注意的是，所有经过检测的反应管不得在此区域打开。 4、扩增