TNAIA 048-2021 功能性饮料中维生素B12的测定 液相色谱-质谱 质谱法.docxVIP

ICS 67.160.10 X 62 TB 团 体 标 准 T/ NAIA 048-2021 功能性饮料中维生素 B12 的测定液相色谱-质谱/质谱法 Determination of vitamin B12 in fμnctionaL beverage, LC-MS/MS 2021-05-30 发布 2021-06-01 实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位：宁夏菲杰特检测有限公司、宁夏化学分析测试协会。本文件主要起草人：朱斐全、张海星、李亚辉、张小飞。 本文件为首次发布。 功能性饮料中维生素 B12 的测定 液相色谱-质谱/质谱法 范围 本文件规定了功能性饮料中维生素 B12 的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本文件适用于功能性饮料食品中维生素 B12 的测定。 本方法功能性饮料取样量为 50.0 g 时，方法检出限为 0.06 μg/kg。 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682-2008 《分析实验室用水规格和试验方法》 GB/T 5009.217-2008 《保健食品中维生素 B12 的测定》 术语和定义 原理 采用维生素 B12 免疫亲和柱对试样提取液中维生素 B12 进行富集并去除部分杂质，经超高效液相色谱-质谱/质谱法，正离子模式进行测定，外标法定量。 试剂与材料 试剂 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682-2008 中规定的一级水。 甲醇（CH3OH）：色谱纯。 乙酸铵（C2H7NO2）：色谱纯。 氢氧化钠（NaOH）。 柠檬酸（C6H8O7）。 磷酸二氢钾（KH2PO4）。 乙醇（C2H6O）。 试剂配制 氢氧化钠溶液（1 moL/L）：称取 4.0 g 氢氧化钠固体颗粒，加适量水溶解后，冷却后用水稀释至 100 mL，混匀备用。 氢氧化钠溶液（0.1 moL/L）：准确移取 10.0 mL 1 moL/L 氢氧化钠溶液，用水稀释并定容至 100 mL，混匀备用。 磷酸缓冲液（pH 6.5）：称取 0.68 g 磷酸二氢钾，加 0.1 moL/L 氢氧化钠 15.2 mL，加水溶解，再用水稀释并定容至 100 mL，混匀备用 乙醇溶液（5 %）：准确移取 5.0 mL 乙醇，用水稀释至 100 mL，混匀备用。 乙酸铵溶液（10 mmoL/L）：称取 0.77 g 乙酸铵，加水溶解后，再用水稀释并定容至 1000 mL 后，混匀，经过滤、超声脱气后备用。 标准品 维生素 B12 标准品（C63H88CoN14O14P，CAS 号：68-19-9）：纯度≥98.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 标准溶液配制 维生素 B12 标准储备液：称取维生素 B12 标准品 10 mg（精确到 0.0001 g），用 5 %乙醇溶液溶解，并定容至 10 mL 棕色容量瓶中，既得 1 mg/mL 的标准储备液，冷藏保存。 维生素 B12 标准中间液：精密移取 0.1 mL 维生素 B12 标准储备液于 10 mL 容量瓶中， 用水定容至刻度，摇匀既得 10 μg/mL 的标准中间液，冷藏保存。 维生素 B12 标准使用液：精密移取 0.1 mL 维生素 B12 标准中间液于 10 mL 容量瓶中， 用水定容至刻度，摇匀既得 1 μg/mL 的标准使用液，冷藏保存。 维生素 B12 系列标准工作液：分别精密移取一定量的维生素 B12 标准使用液于 10 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，配成最终浓度为 0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、10.0 ng/mL、20.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100 ng/mL、200.0 ng/mL 的系列标准工作溶液，供高效液相色谱-质谱/ 质谱仪测定。（临用现配） 5.5 材料 一次性微孔滤头：0.22 μm，水相。 免疫亲和净化柱：维生素 B12 免疫亲和净化柱，规格：1000 ng/3mL，或相当者。使用前先用 10 mL 水淋洗小柱中未键合的化合物。 仪器和设备 高效液相色谱-质谱/质谱仪。 6.2 分析天平：感量 0.001 g 和 0.0001 g。 超声波清洗机。 离心机：转速≥4000 r/min。 氮吹仪。 试样制备与处理 碳酸型功能性饮料：取 150 mL 混匀后的样液于超声波中脱气 10 min 后，备用。 果粒或果汁型功能性饮料：取混