《兽医传染病学》第1章5病毒学基础.ppt

特异性抗体用电子致密物质，如铁蛋白、过氧化物酶等标记后，使之与组织超薄切片中的抗原结合，在电镜下观察到标记物所在位置，即为抗原抗体反应的部位。 酶标记染色 胶体金双标记 双向免疫扩散试验 感染细胞的培养液中有许多游离病毒存在，具有凝集红细胞的作用 二、 血凝作用 多见于以出芽方式释放的病毒。 能感染动物的具有血凝作用的病毒如：新城疫病毒、流感病毒、细小病毒等。 血凝试验 第4节 病毒的血清学检测 是一种常用的诊断病毒病的方法。 可采用病毒中和试验、免疫染色技术、免疫沉淀技术、免疫转印技术和ELISA等免疫血清学方法检查病毒抗原。 virus 1.中和反应 观察特异性抗体能否保护易感的试验动物死亡，能否抑制病毒的细胞病变效应。凡能与病毒结合，使其失去感染力的抗体又称中和抗体。 2、血凝抑制试验 针对具有血凝活性病毒的抗体可以阻断病毒与红细胞的结合，从而抑制血凝活性。 因为抗体的特异性，血凝抑制试验具有特异性。 血凝抑制试验 * 血凝抑制试验 3、病毒蛋白的检测 检测细胞或者组织中的病毒蛋白，以确定特定的病毒蛋白在细胞中的定位、病毒复制过程等，确定病毒在组织中的分布特征等。 所用的方法主要有免疫荧光抗体技术、免疫酶染色技术等。 免疫荧光抗体技术检测细胞和组织的特异性的病毒蛋白 免疫酶染色技术检测细胞和组织的特异性的病毒蛋白 细胞 组织 * 免疫荧光技术 4.酶联免疫吸附试验 （ELISA） 将已知的抗体或抗原结合在某种固相裁体上，并保持其免疫活性。测定时，将待检标本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应。然后加入酶的作用底物催化显色，进行定性或定量测定。 （1）间接ELISA （2）夹心ELISA 3′ 3′ 5′ 5′ 3′ 3′ 3′ 3′ 3′ 3′ 5′ 5′ 5′ 5′ 5′ 5′ 3′ 3′ 5′ 5′ 3′ 3′ 5′ 5′ 模板DNA双链 形成新的双链DNA 退火 变性 第5节 病毒核酸的检测 聚合酶链式反应 （PCR） 实验中用的模板是DNA，如要检测RNA需要反转录成DNA才能以PCR进行检测。 * 123bp 246bp 369bp 492bp M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 PCR技术 2. 核酸杂交技术 核酸探针（probe）是指能与特定核酸序列发生特异性互补的已知核酸片段，可检测待检样品中特定的基因顺序。 ①Southern杂交分析：　　由英国Southern (1975)发明，将琼脂糖中的DNA转移到尼龙膜，进行DNA分子杂交分析的方法。　　筛选基因库得到阳性克隆，将限制性酶酶切，Southern杂交结合，绘制限制性酶图谱。 ②. Northern杂交分析：与Sorthern杂交的原理和程序相同。　用于分析克隆的基因在某一细胞或组织的转录水平，检测mRNA的存在。 ????????????????????????????????????????????????? * Integrated gene →﹛ DS → SS → 1 2 3 4 A 3.5 → 2.1/2.4 → GAPDH → kb 1 2 3 4 B Southern blot 和 Northern blot 技术 ③原位杂交 用单链RNA或DNA探针通过杂交法对细胞或组织中的基因或mRNA分子在细胞涂片或组织切片上进行定位的方法。 * Western blot技术 * 基因芯片技术 本章小结 1、病毒的基本特征。 2、病毒的形态、结构。 3. 何谓病毒的复制与复制周期? 4、病毒的增殖过程。 5、病毒的感染与免疫。 6、病毒的诊断与防治。 ⑵干扰素抗病毒作用的特点： a 广谱抗病毒 b 抑制病毒而不是杀病毒 c 抗病毒作用具有种属特异性 d 间接抗病毒 二、特异性免疫(specific immunity) ㈠体液免疫 IgG、IgM、IgA（sIgA） ㈡细胞免疫(cellular immunity) T、K、NK等 第七章 病毒的检测 病毒的检测 电镜技术 血清学试验 分子生物学技术 病毒的分离鉴定 标本采集与送检 第一节 病毒的分离和鉴定 科赫法则(Koch‘s postulates)又称证病律，通常是用来确定侵染性病害病原物的操作程序。 包括： 　　1、在每一病例中都出现相同的微生物，且在健康者体内不存在； 　　2、要从寄