内标法测定含量.pptVIP

中药制剂的含量测定技术 ——内标法测定含量 * 目录 基础知识 1 必备知识 2 拓展知识 3 * 基础知识 原理 利用色谱峰的峰面积或峰高与待测组分的浓度或质量成正比的原理，选用与检测器相对应的纯物质作标准物质（内标物），将内标物加到供试品中，用气相色谱仪测得待测组分和内标物的峰面积或峰高，将待测组分和内标物的峰面积或峰高相比较进行定量的方法称为内标法。 内标法可分为内标一点法、校正因子法、工作曲线法。 峰面积测量的准确度，直接影响定量结果的准确度。对于不同峰型的色谱峰，在计算峰面积时采用不同的公式。 （1）对称峰的峰面积计算公式：A =1.065 h × W1/2 式中，A为峰面积；h为峰高；W1/2为半峰宽。 （2）不对称峰的峰面积计算公式： 式中，A为峰面积；h为峰高；W0.15 和W0.85分别为0.15及0.85峰高处的峰宽。 （3）用数字积分以计算峰面积：数字积分仪具有测量精密度高、线性范围宽、操作简便等优点。色谱专用微机处理机能自动记录、储存色谱峰高、面积等数据，并能进行定量运算，给出测量结果及打印报告等。 一、峰面积的计算公式 必备知识 为使峰面积或峰高与其浓度或质量相对应，因此必须引入校正因子。校正因子分为绝对校正因子和相对校正因子。 （1）绝对校正因子： Wi = fi×Ai Wi = Ai/Si 式中：fi为比例常数，称为绝对校正因子，为单位峰面积或峰高代表的i组分的量；Wi为待测组分i的质量；Ai为待测组分i的峰面积或峰高；Si 为单位待测组分i的峰面积或峰高，简称响应值；fi 、Si为绝对定量校正因子，单位相同时二者为倒数：fi = 1/Si 二、定量校正因子 必备知识 （2）相对校正因子：相对校正因子是指某组分i与内标物s绝对校正因子的比值。面积相对质量校正因子又称质量校正因子或相对校正因子： 式中：fW为相对校正因子；fi 为待测组分i的绝对校正因子；fs 为内标物的绝对校正因子；Ai、AW和Wi、Ws分别代表待测组分i的纯品和内标物s的峰面积和质量。 二、定量校正因子 必备知识 （1）工作曲线法：①用相同的方法配制对照品溶液与供试品溶液；②绘制标准曲线或求出回归方程；③在标准曲线上查出供试品中待测组分的含量，或用回归方程计算出供试品中待测组分的含量。 （2）校正因子法：精密称取供试品Wi克，加一定量精密称取的内标物Ws克,由两者的峰面积或峰高之比，用内标校正因子计算含量。 由公式： 得 三、定量分析方法 必备知识 (3) 内标法加校正因子法（内标对比法） 计算校正因子的公式： 式中， 为内标物质的峰面积（或峰高）； 为对照品的峰面积（或峰高）； 为内标物质的浓度； 为对照品的浓度。 计算供试品中待测组分量的公式： 式中， 为供试品中待测组分的浓度； 为供试品峰面积（或峰高）； 为供试品中内标物质的浓度； 为相应内标物质的峰面积。 三、定量分析方法 必备知识 三、定量分析方法 必备知识 如果供试品溶液的浓度为C，则供试品中被测组分的百分含量用下式计算： 内标法是一种相对测量法，由于内标物与待测物同时进样，在相同条件下记录色谱图，可抵消由仪器不稳定或进样量不准确等原因带来的定量分析误差。 四、操作步骤和方法 必备知识 1．测试溶液的制备 （1）对照品溶液的配制：按药品标准中各品种项下的规定，精密称（量）取待测组分i的对照品和内标物质，分别配制成溶液，精密量取各溶液，配成测定校正因子用的对照品溶液。 （2）供试品溶液的配制：按各品种项下的规定，精密称（量）取供试品和内标物质，分别配制成溶液，精密量取各溶液，配成测定用的供试品溶液。 2．系统适应性试验 除另有规定外，气相色谱法的系统适应性试验，按高效液相色谱法中的测定。 四、操作步骤和方法 必备知识 3．进样测试 按各品种项下的规定，分别量取对照品溶液及供试品溶液进样测试。一般测定3次以上。 4．相对校正因子的测定与计算 准确称量待测组分i的纯品与内标物s，按各品种项下要求配制成溶液，取一定体积的溶液进样，得到两个色谱峰面积Ai、AW，按下式计算相对校正因子。 或 四、操作步骤和方法 必备知识 5．含量计算 由于气相色谱法进样量小，且进样量不易准确控制，故外标法较少用，主要采用内标法。在中药制剂分析中，校正因子多数情况下是未知的，因此采