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红细胞膜缺陷性贫血及其实验诊断 一、红细胞膜的结构与功能　　1.红细胞膜的组成与结构：红细胞膜含脂类40%，蛋白质50%，碳水化合物10%。膜的主要蛋白有主体蛋白和外周蛋白。后者包括收缩蛋白、肌动蛋白、锚蛋白和区带（4.1～4.5）等，即骨架系统，起支架作用，对维持红细胞的形状、稳定性和变形性有重要作用。膜的主要脂类为磷脂和胆固醇，起屏障和保持内环境稳定性作用。　　2.红细胞膜的功能：屏障作用和可变性；半透性；免疫性；受体特性：激素类受体、递质类受体、丙种球蛋白受体、病毒受体、EP0受体和铁蛋白受体等。　　3.影响红细胞膜稳定的因素：红细胞能量代谢紊乱；红细胞膜有遗传性缺陷；酶缺陷。　　二、红细胞膜缺陷的检验及其应用　　1.红细胞渗透脆性试验　　（1）原理：检测红细胞对不同浓度低渗盐溶液的抵抗力。红细胞在低渗盐溶液中，当水渗透其内部达一定程度时，红细胞发生膨胀破裂。根据不同浓度的低渗盐溶液中红细胞溶血的情况，通过红细胞表面积与容积的比值，反映其对低渗盐溶液的抵抗性。比值愈小，红细胞抵抗力愈小，渗透脆性增加。反之抵抗力增大。　　参考值：开始溶血0.44%～0.42%（NaCl液），完全溶血0.34%～0.32%（NaCl液）。　　（2）临床意义：　　脆性增高见于遗传性球形细胞增多症、椭圆形细胞增多症等；　　降低见于阻塞性黄疸、珠蛋白生成障碍性贫血、缺铁性贫血等。　　2.自身溶血试验及其纠正试验　　（1）原理：红细胞在37℃孵育48小时，其间由于膜异常引起钠内流倾向明显增加，ATP消耗过多；或糖酵解途径酶缺乏所引起ATP生成不足等原因可导致溶血，称为自身溶血试验。在孵育时，加入葡萄糖或ATP作为纠正物，观察溶血可否有一定的纠正，称为纠正试验。　　参考值：48小时内不加纠正物的溶血度小于3.5%，加葡萄糖溶血度小于1.0%，加ATP的溶血度小于1.0%。　　（2）临床意义：　　膜缺陷患者溶血度增加，加纠正物可被纠正；　　G6PD缺陷症者溶血度轻度增加，能被葡萄糖纠正；　　自身免疫性溶贫溶血度轻度增加，加葡萄糖无预示价值；　　PNH本试验常正常。　　3.酸化甘油溶血试验　　（1）原理：当甘油存在于低渗溶液氯化钠磷酸缓冲液时，可阻止其中的水快速进入红细胞内，使溶血过程缓慢。但甘油与膜脂质又有亲和性，可使膜脂质减少。当红细胞膜蛋白及膜脂质有缺陷时，它们在pH6.85甘油缓冲液中比正常红细胞溶解速度快，导致红细胞悬液的吸光度降至50%的时间（AGLT50）明显缩短。　　参考值： AGLT50大于1800s（30min）　　（2）临床意义：　　减少见于遗传性球形细胞增多症（25～150s）、肾功能衰竭、慢性白血病、自身免疫性溶贫和妊娠妇女。　　4.蔗糖溶血试验 为PNH简易重要的筛查试验。　　（1）原理：是根据PNH患者的红细胞，在低离子强度的蔗糖溶液中对补体敏感性增强，经孵育，补体与红细胞膜结合加强，蔗糖溶液进入红细胞内，导致渗透性溶血而设计的。　　参考值：定性试验：正常为阴性；定量试验：正常溶血率＜5%。　　（2）临床意义：　　PNH患者为阳性或溶血率增加，可作为PNH的筛选试验。　　自身免疫性溶贫有的可为阳性，白血病、骨髓硬化时可出现假阳性。　　5.酸化血清溶血试验　　（1）原理：阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）患者体内存在对补体敏感的红细胞。酸化血清溶血试验，也称Ham test，即红细胞在酸性（pH6.4～6.5）的正常血清中孵育，补体被激活，PNH红细胞破坏而产生溶血。而正常红细胞不被溶解，无溶血现象。　　结果：阴性。　　（2）临床意义：　　是PNH的确诊试验。阳性主要见于PNH，某些自身免疫性溶血性贫血发作严重时可呈阳性。　　6.红细胞膜蛋白电泳分析　　（1）原理：将制备的红细胞膜样品进行SDS电泳，根据样品中各蛋白相对分子质量的不同，分离得到红细胞膜蛋白的电泳图谱，从而可见各膜蛋白组分百分率。　　参考值：各种膜蛋白组分百分率变化较大，多以正常红细胞膜蛋白电泳图谱作比较。或以带3蛋白为基准，各膜蛋白含量以与带3蛋白的比例表示。　　（2）临床意义：　　许多溶血性疾病常见红细胞膜蛋白异常。各种膜缺陷疾病如遗传性球形红细胞增多症有收缩蛋白等含量减低或结构异常。某些血红蛋白病骨架蛋白等可明显异常。　　三、遗传性红细胞膜缺陷性贫血的实验诊断　　1.遗传性球形红细胞增多症　　（1）血象：红细胞呈球形，直径小于6μm，大小一致，数量占10%～70%，硬度增加，中心淡染区消失，简易红细胞滚动试验呈阳性。　　（2）骨髓象：骨髓红细胞系统增生活跃。　　（3）特殊试验　　①脆性试验：红细胞常于0.68%NaCl液中开始溶解，0.4%NaCl液中完全溶解，盐