细胞生物学实验.ppt

2,4-二硝基酚（DNP） 结构式 DNP是氧化磷酸化的解偶联剂 ，解偶联剂使氧化和磷酸化脱偶联，氧化仍可以进行，而磷酸化不能进行，解偶联剂作用的本质是增大线粒体内膜对H+的通透性，消除H+的跨膜梯度，因而无ATP生成，解偶联剂只影响氧化磷酸化而不干扰底物水平磷酸化，解偶联剂的作用使氧化释放出来的能量全部以热的形式散发。 2,4-二硝基苯酚(DNP)等药剂因阻碍磷酸化(形成高能磷酸键)，会抑制或减慢细胞质流动 细胞生物学实验 * *  * * * * * 毫渗透压摩尔浓度 * 丙二酸与酶的亲和力明显大于琥珀酸与酶的亲和力. 如相对地增加琥珀酸的浓度,则可减轻丙二酸的抑制作用. * * *  * 磷/氧比（P/O ratio）是线粒体氧化磷酸化活力的一个重要指标，它是指氧化磷酸化中每消耗一摩尔氧时所消耗的无机磷酸摩尔数之比。 用荧光素磷脂酰乙醇胺直接测定线粒体内膜外表面pH焦选茂 熊敬维 细胞生物学实验 生物科学 实 验 室 守 则 1、不迟到，不早退，更不能无故缺课； 2、进实验室要穿白大褂。实验室内禁止喧哗。 3、实验前必须认真预习，熟悉实验的内容。 4、实验中应严格按操作规程进行，认真操作、仔细观察，及时记录实验现象及结果； 5、在实验的过程中制造的任何垃圾都要丢到垃圾筐里（或先放在自己的桌面废物缸内），严禁随地投弃！ 实 验 室 守 则 6、实验器具应保持清洁，用过的玻璃器皿必须洗净后放回原处。实验台面应保持整洁，仪器、药品摆放整齐。公用试剂及用具盒用完后，应立即盖好放回原处。 7、执行值日生制度，每天安排3-4人值日，其职责是负责实验器具的整理、操作台、水槽、地板等实验室卫生工作。 8、保证安全 9、实验结束后认真分析和总结，实事求是、独立地完成实验报告 实验报告格式 班级、姓名、学号、日期 实验项目 实验目的 实验原理 实验用品(实验材料,实验试剂,实验仪器用具) 实验步骤 实验结果（重点） 分析和讨论（重点） 参考文献 实验一、细胞质流动及其影响因素实验二、叶绿体的分离与荧光观察 实验三、线粒体的制备与活性鉴定实验四、细胞膜的渗透性与植物液泡系的观察 实验五、细胞的凝集反应与细胞融合 实验六、动植物细胞骨架的观察实验七、细胞吞噬作用和细胞中过氧化物酶的显示 实验八、电子显微镜演示 细胞生物学实验安排 第9-16周32学时 实验一细胞质流动及其影响因素 细胞生物学实验 观察植物细胞质流动现象 了解影响细胞质流动的因素 实验目的 实验原理 在多种植物的细胞中都能观察到植物细胞质流动现象，它是细胞活动强弱的重要指标。 细胞质流动现象的产生，是细胞骨架中微丝肌动蛋白与肌球蛋白相互滑动的结果。 细胞质流动要消耗能量，受各种因素诸如温度、渗透压及各种离子的影响。 引起细胞质流动的因素 内因 微丝束（肌动蛋白纤维）、肌球蛋白、ATP 外因 物理：温度、光、机械刺激 化学： pH、电解质、非电解质、渗透压、呼吸抑制剂 细胞质流动的主要形式 细胞质环流：在液泡发达的植物(如黑藻、 轮藻、伊乐藻)细胞中，细胞质成薄层沿着细胞膜以一定的速度和方向循环流动。这种不断地循环流动称为细胞质环流。 穿梭流动：穿梭流动是细胞质流动的另一种形式，它与环流不同，是向相反方向来回穿梭。由于流动方向在一定时间内来回交换，因此叫穿梭流动。 布朗运动：在活细胞中可以看到细胞质内的许多小颗粒在无规则地跳动着，这在暗视野显微镜下观察更为明显，叫做布朗运动。布朗运动的产生除了与微丝的存在有关外，还与微梁网格的收缩有关。 实验用品 实验材料：紫鸭趾草花丝，黑藻（水王荪、轮叶黑藻）叶。 实验用品 实验试剂： 0.17 mol/L, 0.35 mol/L, 1 mol/L 氯化钠 0.17 mol/L， 0.35 mol/L , 1 mol/L 丙二酸钠 1 mmol/L 2,4﹣二硝基酚(dinitrophenol, DNP） 1 mol/L 甘露醇 实验仪器、用具：显微镜，载玻片，盖玻片，尖头镊子，刀片,吸水纸等 实验设计：不同因素对细胞质流动的影响 渗透压： 强电解质 0.17 mol/LNaCl 0.35mol/L NaCl 1.0mol/LNaCl溶液（高渗） 弱电解质 0.17mol/L丙二酸钠 0.35mol/L丙二酸钠 1.0mol/L丙二酸钠 非电解质 1 mol/L 甘露醇 生物氧化抑制剂： 1mmol/L 2,4-二硝基酚（解偶联剂） 丙二酸钠溶液（竞争性抑制剂） 既是电解质又是竞争性抑制剂 渗透压计算 稀溶液的渗透压可根据范荷夫公式计算： P=iCRT 参数说明 C：溶液的摩尔浓度； R：气体常数（0.083升·巴摩尔-1·度-1）； i：渗透常