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第一页,共三十八页,2022年,8月28日 WSSV的形态学 WSSV属线头病毒科Nimaviridae,完整包膜的病毒体(粒子)长210-380 nm,最宽处70-167 nm。用负染电镜观察,WSSV的病毒体末端具尾状附器(tail-like appendage)。膜厚6-7 nm,为脂质三层膜结构,由不透明电子层分隔成两层透明层。核衣壳位于膜内,为弹簧体型结构,由直径10 nm的球形蛋白亚基构成。这些蛋白亚基沿长轴垂直排列成,每22 nm就有4-15层,使核壳体呈斜纹格形。核壳体从膜里出来后变长,表明它是紧紧压缩在病毒体内。各核衣壳规格各异,长度变化在180-420 nm之间,宽在54-85 nm之间,具有厚6 nm的外壁。 第二页,共三十八页,2022年,8月28日 无包涵体的杆状病毒,横切片为圆形。核衣壳一端钝圆,另一端为平头,表面有分段的与与病毒粒子的长轴垂直的15节花纹结构,为指环域堆(ring-structure) 积形成,每个指环结构为由一排直径为10 的亚单位。 第三页,共三十八页,2022年,8月28日 第一个被测得的基因组遗传密码的海洋生物病毒、目前已测得的最大的动物病毒之一。 第四页,共三十八页,2022年,8月28日 基因组及其分类 环形双链DNA分子,A+T含量占59%,分布均匀。不同隔离群的基因组大小各异,如中国大陆的WSSV为305kbp,台湾省的307kbp,泰国的293 kbp。 第五页,共三十八页,2022年,8月28日 WSSV的结构蛋白 有40多种蛋白质,在转录调节病毒增殖和/或DNA复制调节过程中,还有结构蛋白。WSSV病毒体内至少有38种结构蛋白,其中膜上有21种,核衣壳中有10种,间层膜和核衣壳之间有5种。 在膜蛋白VP31、VP110和VP281、间层蛋白VP36A和核衣壳蛋白VP664上有细胞附着基序,对病毒进入细胞有重要作用。其它蛋白(如VP28、VP39B、VP41A、VP51 A、VP51B、VP68、VP124、VP150、VP187、VP281和VP292)和胶原状蛋白位于膜内;而蛋白VP35、VP466、VP15和VP76位于核衣壳上,具有不同的功能。 抗体分析表明,VP28和VP24可能与病毒的穿透作用有关。最近发现,对虾血细胞中的25-Kda 膜蛋白能结合到重组VP28,即WSSV病毒体上。这种蛋白质与小分子GTP-结合蛋白Rab7高度同源。以Rab7抗体进行的中和试验表明,它能抑制WSSV病毒体与细胞结合,减少WSSV感染后的死亡。 第六页,共三十八页,2022年,8月28日 用RNA干扰法研究 与VP19相对应的长双链RNA能诱导凡纳滨对虾特殊的抗病毒反应,抑制WSSV感染,大幅度降低死亡率。 而相应的VP28、VP281、WSSV蛋白激酶(PK)及不相关的绿色荧光蛋白的长双链RNA能提高中国明对虾的成活率,用VP28和PK双链 RNA处理的对虾成活率最高。连续3次注射短小的VP28干扰RNA,完全抑制了WSSV对日本对虾的感染。 第七页,共三十八页,2022年,8月28日 WSSV基因组含531-684个阅读框,具ATG启动密码子,其中181-184阅读框编码含51-6077个氨基酸组成的功能蛋白,相当于基因组遗传信息的92%。约21%-29%的阅读框编码WSSV蛋白,即与其他已知蛋白相同。这些蛋白包括核酸代谢和DNA复制酶,如DNA聚合酶、非特异性核酸酶、核苷酸还原酶的大小亚基、胸苷激酶、胸苷酸激酶、嵌合的胸苷-胸苷酸激酶、胸苷酸合成酶、dUTP酶和两种激酶。推测还有其他功能蛋白,如胶原状蛋白、鞭毛蛋白、几丁质酶、蛹壳状蛋白、细胞表面絮状蛋白、kunitz状蛋白酶抑制因子1类细胞因子受体、sno状肽和嵌合抗凋亡蛋白。有3个阅读框(泰国隔离群的151、366和418)可编码WSSV潜伏期的蛋白。 第八页,共三十八页,2022年,8月28日 WSSV还有3个能立即转录的即时早期基因(台湾隔离群的26、242和418阅读框)。这些基因独立转录,与寄主细胞从头合成的病毒蛋白无关,在体外直接表达。这些即时早期基因在感染期间决定寄主范围,调节反式作用因子。 编码DNA复制和核苷酸代谢所需的蛋白在病毒复制初期即开始了转录合成。初期转录的WSSV基因一般具有TATA框,转录起始位点上游具有20-30核苷酸。结构蛋白是在感染后期合成的,一般有简并TIS基序(A/TNAC/G)),该序列位于富含A/T区下游25个碱基的位置,与节肢动物的TIS基序相似。WSSV有一个内核糖体进入位点(IRES)元件,它能使以双顺反子形式构建的谷胱甘肽S转移酶(GST)和绿色荧光蛋白(GFP)在体外同时有效地表达。 第九页,共三十八页,2022年,8月28日 泰国、中国大陆和
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