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pcr 反应实验报告 篇一：聚合酶链式反应PCR 实验报告 实验二 聚合酶链式反应（PCR ） 一、 实验原理 聚合酶链式反应（PCR ）是利用DNA 片段旁侧两个短的 单链引物，在体外快速扩增特异 DNA 片段的技术。它应用 热稳定的聚合酶，通过双链 DNA 模板的热变性、引物退火 和引物延伸的重复循环，DNA 片段以指数方式增加了百万 倍。从非常微量的DNA 甚至单个细胞所含有的DNA 起始， 可产生ug 量的PCR 产物。 二、 器材与试剂 1.器材：移液器，EP 管，热盖PCR 仪，电泳仪，量筒， 锥形瓶，微波炉，电子天平，紫外照色仪 2.试剂：引物，模板，Taq DNA 聚合酶，原料（dNTPs ）， 缓冲液与Mg2+ ，H2O, 2*PCRmix 溶液，DNA 染料 三、 实验步骤 PCR 反应体系的建立 1 取离心管，依次加入试剂混匀 1 ．H2O 12μl 2 ．模板 1μl 3 ．引物T7 1μl 4 ．引物 sp61μl 5 ．2*PCRmix15μl PCR 仪的热循环反应 把离心管放入PCR 仪中，由变性--退火--延伸三个基本反 应步骤构成 1. 模板DNA 的变性：模板DNA 经加热至94℃左右一定 时间后，使模板DNA 双链或经PCR 扩增形成的双链DNA 解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准 备； 2. 模板DNA 与引物的退火(复性)：模板DNA 经加热变性 成单链后，温度降至56℃左右，引物与模板DNA 单链的互 补序列配对结合； 3. 引物的延伸：经加热至72℃左右DNA 模板--引物结合 物在TaqDNA 聚合酶的作用下，以dNTP 为反应原料，靶序 列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新 的与模板DNA 链互补的半保留复制链。重复该循环30 次， 每次需要2-3 分钟。 电泳检测结果 2 扩增产物在琼脂糖凝胶电泳中，电泳结束后，放到紫外照 射仪中进行透射，电泳明胶显示清晰的条带，如下图所示 加 入的为1 号样，出现在500bp 左右条带，而预算结果为扩增 出492bp 条带，故实验成功。 四、 讨论 1. Mg2+离子浓度对PCR 扩增效率影响很大，浓度过高可 降低PCR 扩增的特 异性浓度过低则影响PCR 扩增产量甚 至使PCR 扩增失败而不出扩增条带。 2. 变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性;退火 温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温 度过高影响引物与模板的结合而降低PCR 扩增效率。 3. EB ：溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察 琼脂糖中的DNA ，可与DNA 结合，用标准302nm 紫外光 透射仪激发并放射出橙红色信号。 4. 溴酚蓝：电泳指示剂，相当于300bp 的DNA 的电泳速 度。 5. 100bp DNA Marker Ⅰ是由单独的PCR 扩增产物混合而 成，已含有 1xLoading Buffer,可以直接电泳。包括 11 条双 链DNA 片断：100bp、200bp、300bp、400bp、500bp、600bp、 700bp、800bp、900bp、1000bp 和1500bp。特异性加强500bp。 每次上样4～5μL。 6. 模板一般采用50ng-1ug 或102--105 拷贝，浓度过高反 3 而会抑制反应的进行。 7. 引物的与模板的互补程度决定了PCR 的特异性，常用 0.1—0.5uM，浓度过高则特异性下降，会形成引物二聚体影 响试验结果。 五、 结果及结论： 经电泳检测到 PCR 扩增产物中出现 500bp 左右条带， PCR 扩增成功。 篇二：PCR 实验报告 普通生物学实验报告 实验名称：用PCR 扩增的方法鉴别不同物种来源的肌肉 一、特异性目的片段DNA 的扩