花药与花粉培养.pptxVIP

花药与花粉培养第二节 小孢子的形成和花粉的发育途径一、小孢子的正常发育二、花药培养时花粉发育途径1营养细胞发育途径(A型)2生殖细胞发育途径3营养细胞和生殖细胞并进发育途径4花粉均等分裂途径一、小孢子的正常发育第一期:四分孢子形成期 第二期:单核期特点:特化的细胞壁逐渐形成。可分为:单核早、中、晚(靠边)第三期:双核期 第四期:三核期 二、花药培养时花粉发育途径1、营养细胞发育途径(A型)花粉 生殖核(小)------不分裂或分裂几次后退化 营养核(大)-----经多次分裂而形成多细胞团,并迅速增殖 而突破花粉壁,细胞持续分裂形成类胚体或愈 伤组织,最后形成单倍体植株 常见的植物:烟草、大麦、光叶曼陀罗、小麦、小黑麦和辣椒2、生殖细胞发育途径完全不再分裂 营养细胞只分裂有限几次即停止单倍体植株愈伤组织多次分裂发育生殖细胞多细胞团胚状体只在天仙子中出现 3、营养细胞和生殖细胞并进发育途径DNA复制两种营养核发生融合发育2n、3n或4n胚状体有两种情况 多次分裂愈伤组织营养细胞大的多细胞团单倍体植株同时发育1 多次分裂生殖细胞小的多细胞团胚状体2 只见于南洋金花中 4、花粉均等分裂途径单倍体植株均等分裂营养核营养细胞愈伤组织花粉多次分裂发育多细胞团生核核生殖细胞胚状体这个途径在南洋金花中相当普遍第三节 花药培养 概念:花药培养(anther culture):指用无菌操作技术将成熟或未成熟的花药接种在人工培养基上,诱导花粉单性发育形成植株的过程。 一、花药培养的一般操作程序1、培养基的选择2、材料选取3、材料预处理4、材料消毒5、接种6、脱分化培养7、再分化培养8、花粉植株移植9、染色体加倍1、培养基的选择Nitsch H、MS被广泛用于双子叶植物的花药培养。B5:被广泛用于十字花科及豆科植物的花药培养。禾谷类植物的花药培养,早期多采纳Miller培养基、MS培养基、N6培养基和马铃薯2号培养基。 Sunderland(1984)设计了C17培养基,用于水稻、小麦、大麦、小黑麦、黑麦、玉米和甘蔗等禾谷类作物的花药培养。2、材料选取不同植物花药培养的合适花粉发育时期 植物种减数分裂中期减数分裂晚前期四分体单核期双核期成熟期水稻小麦玉米油菜大麦番茄茄子辣椒拟南芥菜甘蓝苹果葡萄烟草小黑麦小黑麦×羊茅杨树000000000000000000003、材料预处理低温:高温生长素其他方法处理常能提高愈伤组织和苗分化的频率。4、材料消毒取回的材料,在接种前进行表面灭菌,一般用70～75％酒精,将表面擦洗即可。5、接种在无菌接种室或超净工作台上进行接种操作,采纳直径3cm的试管,每管接种花药30～60粒。必须注意:在操作过程中,不应使花药受到损伤,因为损伤常常会刺激花药壁形成二倍体的愈伤组织。损伤的花药要淘汰。6、脱分化培养依照材料不同,选取适宜的基本培养基、适当的生长素比例和最适的温度进行培养,经10～30天可诱导愈伤组织形成。7、再分化培养愈伤组织增殖到1～3mm大小时,应及时进行再分化培养以获得花粉植株。要选择含适当激素水平的培养基进行培养,约经20～30天就能诱导苗的分化。8、花粉植株移植当花粉植株的根系生长良好时,就要及时进行炼苗并移至苗床或大田。试管中花粉植株的移植是一个由异养转变为自养的过程,必须细心管理,保持幼苗的水分平衡和促进新根的发生。9、染色体加倍人工方法:用0、02～0、4%秋水仙素处理植株,双子叶植物处理生长点或腋芽,禾本科植物在分蘖期处理。单倍体植株能够通过自发的核内有丝分裂产生的二倍体。二、花药培养的方法琼脂固体培养法在培养基中加入0、5～0、7%琼脂,使培养基呈半固体状态。加入的琼脂量因琼脂质量而定。琼脂浓度一般以花药有1/3浸入而又不沉没于琼脂中为宜。液体培养法液体培养的培养基厚约0、5cm,若能让花药漂浮在液面上,效果最好。 加入聚蔗糖(Ficoll),可使花药不下沉而漂浮在液面上 。第四节 花粉培养 含义:花粉培养(pollen culture)是指把花粉从花药中剥离出来,在无菌的人工环境中,以单个花粉粒作为外植体进行离体培养使其进一步生长发育的技术。优点:在于花粉已是单倍体细胞,诱发它经愈伤组织或胚状体发育成的小植株都是单倍体植株,可不能因药壁、花丝、药隔等体细胞组织的干扰而形成体细胞植株。 花粉是研究细胞分化条件、胚胎发生和形态发生机制的较为理想的材料。建立花粉培养实验系统也可为深入开展细胞工程、遗传工程和分子生物学的研究提供技术基础。一、花粉培养的一般操作程序花粉培养与花药培养的一般操作程序基本相同。花粉培养在材料消毒后要将花粉从花药中分离出来,再进行接种,其基本操作程序可参照花药培养。 二、花粉的分离方法自然散落法把花药从未开的花中在无菌条件下取出,直接插接在无菌培养基上,当花药自动裂开时,花粉散