蛋白精氨酸甲基转移酶4通过激活AKT_mTOR通路促进肝细胞癌进展研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 目的： PRMT4 I 是 型蛋白精氨酸甲基转移酶家族成员，它是许多核受体和转录因 子的共激活因子，在调节细胞转录、RNA 剪接、DNA 修复、细胞信号转导等 方面发挥重要作用，参与调节细胞增殖、分化和凋亡。许多研究报道，PRMT4 在多种人类恶性肿瘤中异常表达，包括乳腺癌、肺癌、结直肠癌和前列腺癌。 然而PRMT4在肝细胞癌 （Hepatocellular carcinoma，HCC）发生及进展中的作 用机制尚未得到充分研究。本研究采用构建慢病毒和质粒载体转染相应的肝癌 细胞系，通过上调和下调PRMT4 的表达水平的方法，研究PRMT4表达与肝癌 细胞增殖、迁移和侵袭的关系，并探讨其可能的分子机制，有望为肝癌临床治 疗提供新的途径，对延长病患生存期具有重要意义。 方法： 1、实时荧光定量PCR分析收集的30例临床确诊的肝细胞癌的肿瘤组织和 对应的非肿瘤组织样本，以评估PRMT4 mRNA在肝细胞癌和相应的癌旁组织 中的差异表达，初步分析PRMT4 的表达与肝细胞癌的联系。通过对 140例临 床确诊患者样本的HCC组织芯片(TMA) 进行免疫组织化分析，研究PRMT4 的 表达和病理特征，收集相应的患者临床资料，分析PRMT4表达与临床病理特 征的关系。 2、Western blot 检测PRMT4在肝癌细胞系 （YY-8103、Hep3B、SNU-398 和Huh7）及正常肝细胞系THLE2 中的表达水平，并选择适合肝癌细胞系作为 体外实验模型。构建慢病毒及质粒载体进行细胞转染，使PRMT4在相应的肝 癌细胞系中沉默和过表达，采用CCK-8实验和Transwell 实验检测转染后的肝 癌细胞系中的细胞增殖、迁移和侵袭的情况。在PRMT4过表达的肝癌细胞系 AKT (MMK2206) mTOR ( ) 中分别使用 的特异性抑制剂 和 特异性抑制剂 雷帕霉素 干预处理，检测经抑制剂处理后的细胞增殖、迁移和侵袭变化，并通过 Western Blot探讨PRMT4 的作用机制。 结果： II 摘 要 与癌旁组织相比，PRMT4 在HCC 组织中高表达 （P0.05)。PRMT4 的表 P0.05) 达与甲胎蛋白水平、肿瘤大小、卫星结节和微血管浸润显著相关 （ 。体 外实验结果表明，PRMT4 的过表达促进了体外肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭， 而下调PRMT4 的表达则抑制了这些恶性行为 （P0.05)。机制实验结果显示， 在PRMT4过表达的肝癌细胞系中，AKT/mTOR信号通路蛋白的磷酸化表达上 调，使用该通路抑制剂MK2206或雷帕霉素后可显著减弱PRMT4促进肝癌细 胞的增殖、迁移和侵袭能力 （P0.05)。 结论： PRMT4在肝癌组织和细胞中高度表达，且提示预后不良；PRMT4 的表达 与HCC 患者性别、年龄、HBsAg 感染、肿瘤数量、淋巴结转移无明显相关， 与AFP、肿瘤大小、卫星结节和微血管侵犯明显相关；体外上调PRMT4促进 肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭，体外下调PRMT4 则抑制肝癌细胞的增殖、迁 移和侵袭；PRMT4通过激活AKT/mTOR信号通路促进HCC 的进展。 关键词：PRMT4；肝细胞癌；进展；AKT/mTOR III 目录 目 录 1 1 第 章引言 2 3 第 章材料与方法