上海海洋大学分子生态学课件-18分子生态学+重要生态性状.pptVIP

第一节 重要生态性状的研究可利用正经受自然选择影响的标记来研究适合度相关性状的生态与进化。目前对重要生态性状的研究越来越偏重机制，“组学”技术的发展为相关机制的研究提供了有力的技术支撑。一、cDNA文库和ESTs1.cDNA（互补DNA）cDNA是利用逆转录酶从分离的样本mRNA中生成，因此，cDNA只是某生物有机体内存在的所有基因组DNA的一个小的子样本。不同的生物体或单一有机体的不同组织所表达的mRNA在种类和数量上会呈现出变异。换言之，基因表达会受有机体中特定基因组DNA序列的存在与否的影响，但是也会受环境因子的影响。基因表达的研究称为转录组学（transcriptomics）。 第一节 重要生态性状的研究一、cDNA文库和ESTs2.cDNA文库研究基因表达必须能对特定mRNA的表达及其相应的cDNA序列进行鉴别和/或定量分析，生成cDNA文库是达到这些目的的首要步骤之一。 一、cDNA文库和ESTs3. 分子克隆　　 分子克隆就是用人工的方法将重组质粒DNA导入大肠杆菌感受态细胞，使携带有重组质粒的大肠杆菌获得在抗生素平板上生长的能力，从而与不携带重组质粒的细菌区分开来。待克隆的DNA片段质粒DNA载体重组质粒目的DNA插入质粒载体（酶作用）将重组质粒转入大肠杆菌细胞、质粒及CaCl2混合液在含氨苄青霉素的琼脂糖培养基上培养转化后的大肠杆菌细胞存活（吸收质粒），并不断增殖未吸收质粒的大肠杆菌细胞死亡蓝白斑筛选AmpR抗性基因LacZ是 β-半乳糖甘酶的-α肽基因第一节 重要生态性状的研究 一、cDNA文库和ESTs3. 分子克隆　　 转化是将外源DNA分子引入受体细胞，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段。重组质粒转化进受体细胞时，需诱导受体细胞产生短暂的感受态以摄取外源DNA。大肠杆菌经过特殊的方法处理后（热击法或电转化法），细胞膜的通透性发生暂时性改变，成为能允许外源DNA分子进入的细胞即感受态细胞。化学的方法（热击法）：使用化学试剂（如CaCl2）制备的感受态细胞，通过热击处理将载体DNA分子导入受体细胞；待克隆的DNA片段质粒DNA载体重组质粒目的DNA插入质粒载体（酶作用）将重组质粒转入大肠杆菌细胞、质粒及CaCl2混合液在含氨苄青霉素的琼脂糖培养基上培养转化后的大肠杆菌细胞存活（吸收质粒），并不断增殖未吸收质粒的大肠杆菌细胞死亡第一节 重要生态性状的研究电转化法：使用低盐缓冲液或水洗制备的感受态细胞，通过高压脉冲的作用将载体DNA分子导入受体细胞。 第一节 重要生态性状的研究一、cDNA文库和ESTs4.表达序列标签（expressed sequence tag，EST）EST代表的是从cDNA一段开始的单次测序，产生的序列是所表达基因的一小部分。ESTs是特异性的鉴别工具，能用于对cDNA片段进行唯一鉴别。目前，已有大量的ESTs列入公共数据库如GenBank。二、微阵列微阵列是可以同时获得关于数千不同DNA序列信息的工具，微阵列通过比较不同样本中cDNA的数量来对基因表达进行量化，或者鉴别不同生物基因组DNA序列的变异。 第一节 重要生态性状的研究二、微阵列1. 微阵列是如何发挥作用的？一个微阵列就是一张玻璃片（或其他基质如硅片或玻璃珠系列），其上有大而界限清晰的网格，在网格内分离的点上附着有数百乃至数千不同的短DNA序列（探针）。单一实验所采用的每个微芯片上，探针的一致性及其位置完全是相同的。 第一节 重要生态性状的研究探针靶分子 第一节 重要生态性状的研究二、微阵列2. 微阵列探针探针是短的DNA序列，可能从几种不同的来源中获得：（1）从已知的基因或基因组片段数据库中选择长度在20到100个核苷酸之间的短序列，这些称为寡核苷酸探针；（2）从所研究物种的cDNA中提取出来的未知序列也可用作探针，这些未知探针称为匿名探针。3. 微阵列的应用（1）个体内变异微阵列能用来分析个体内不同组织或器官的基因表达，通过比较单一时间点或几个不同的时间点不同组织或器官的基因表达，有助于阐明 第一节 重要生态性状的研究二、微阵列3. 微阵列的应用（1）个体内变异新的适应性状的起源，或者帮助我们理解基因表达是如何随着环境变量的改变而改变