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高效液相色谱串联质谱法测定红糖中3-硝基丙酸 GAO Yu-feng;PANG Yang-hai;ZHEN Zhen-peng;HUANG Min-xing;YU Gou- bin;GUO Jian-xiong 【摘要】建立了红糖中3-硝基丙酸的高效液相色谱串联质谱检测方法.红糖样品用 乙醇-水溶解，涡旋振荡离心后取上清液，用PWAX固相萃取柱净化，氮气吹干洗脱液, 甲醇-甲酸水复溶后，用高效液相色谱串联质谱检测.采用Luma Omega C18柱 (1即m,100 mmx2.1 mm),以甲醇和水为流动相进行分离，电喷雾负离子模式(ESI- )多反应监测(MRM)检测,外标法定量结果表明,3-硝基丙酸在0.1 ~20pg/L浓度范 围内线性关系良好(r=1.0000),该方法的检出限为0.057pg/kg,定量限为 0.18如g/kg.在2.5、10.50pg/kg的加标水平下,3-硝基丙酸的平均回收率为 79.2%- 85.5%相对标准偏差为5.2%- 7.3%以下(n=6).本方法操作简单、灵敏 度高、结果准确,可用于红糖中3-硝基丙酸的残留量测定. 【期刊名称】《甘蔗糖业》 【年(卷)，期】2019(000)003 【总页数】4页(P56-59) 【关键词】红糖;3-硝基丙酸;高效液相色谱串联质谱法 【作者】GAO Yu-feng;PANG Yang-hai;ZHEN Zhen-peng;HUANG Min- xing;YU Gou-bin;GUO Jian-xiong 【作者单位】;;;;; 【正文语种】中文 【中图分类】TS247 0引言 3-硝基丙酸可由霉变甘蔗中的病原菌甘蔗节菱孢霉产生，是一种强烈的嗜神经毒 素，可对中枢神经系统产生严重的损伤［1-3］。人在摄入含有3-硝基丙酸的食物后， 首先经胃肠道吸收，随后分布于肝、肾组织中，且能透过血脑屏障进入脑组织并富 集［3］。红糖是目前市面上较受欢迎的食糖品种之一，其生产工艺比较简单，保留 了原料甘蔗的很多物质，红糖的质量安全问题一直是人们关注的热点［4-5］。如果 红糖的生产过程使用了霉变甘蔗进行加工，有可能导致3-硝基丙酸在红糖中残留， 引发食品安全风险，因此开发红糖中3-硝基丙酸的检测方法具有重要的意义。 目前，针对甘蔗中3-硝基丙酸的检测方法有离子色谱法、毛细管电泳法、液相色 谱法、高效液相色谱串联质谱法等［6-10］，对于食糖产品中的检测方法并无报道。 与色谱方法比较，高效液相色谱串联质谱法可实现准确定性且具有较高的灵敏度 ［10］。本文将采用超高效色谱串联质谱法建立红糖中3-硝基丙酸的检验方法，并 对目前市面上销售的红糖中残留情况进行了初步的调研。该方法操作简单，检出限 和灵敏度符合食品安全检验的要求。 1实验部分 1.1仪器与试剂 高效液相色谱串联质谱仪AB 5500 Q-Trap （美国AB SCIEX公司）；超纯水机 UPC-I-60L型（成都超纯科技有限公司）；大容量冷冻离心机CL5R（湖南湘仪离心机 仪器有限公司）；多位试管涡旋振荡器Multi Reax（德国Heidolph公司）；超声波 清洗机SB25-12 DTD （宁波新芝生物科技股份有限公司）；氮吹仪N-EVAP112 （美国Organomation公司）；电子天平JE3002GE（梅特勒-托利多仪器上海有限公 司）。 3-硝基丙酸（99.99%，上海安谱实验科技股份有限公司）；甲酸（分析纯，广州化学 试剂厂）；甲醇（色谱纯，德国默克股份两合公司）；无水乙醇（分析纯，广州化学试 剂厂）；氨水（25%，广州化学试剂厂）；0.22顷 有机相滤膜（彼西络科技（广州）有 限公司）；PWAX固相萃取柱（天津博纳艾杰尔科技有限公司）。所用红糖样品均在 市面随机购买。 1.2标准溶液配制 准确称取3-硝基丙酸标准品10.0 mg于10 mL棕色容量瓶中，10%甲醇-0.1%甲 酸水混合溶剂定容，配制成质量浓度为1000 mg/L的标准储备液，于4C条件下 保存。取上述标准储备液逐级稀释，用10%甲醇-0.1%甲酸水定容，配制成浓度 为 20、10、5、1、0.5、0.2.0.1 pg/L 的溶液。 1.3提取和净化 准确称取2.00 g红糖样品于50 mL离心管中，加入10 mL乙醇-水（9:1）,充分 涡旋5 min,在4900 r/min转速的离心机下离心5 min ；取3 mL上清液于50 mL离心管中，加入3 mL超纯水，充分涡旋5 min,待净化。PWAX固相萃取柱 先加入3 mL甲醇，再加入3 mL超纯水活化后，取4 mL试样溶液过柱，先用5 mL超纯水淋洗，再用10 mL 10%氨化甲醇洗脱，收集洗脱液。经氮气吹干后， 用2 mL10%甲醇-0.1%甲酸水复溶，超声20 min，过0.