核酸的结构与功能.ppt

帽子结构：识别翻译起始 polyA：维持mRNA的稳定性 功能 第六十二页，共一百二十页，2022年，8月28日 原核生物mRNA为多顺反子，无修饰碱基。 多顺反子mRNA(polycistronic mRNA)：一条mRNA链上有多个编码区 （2）原核细胞mRNA 第六十三页，共一百二十页，2022年，8月28日 约占全部RNA的80% 是核糖核蛋白体的主要组成部分 功能与蛋白质生物合成相关。 3、rRNA Ribosome RNA 第六十四页，共一百二十页，2022年，8月28日 * rRNA的种类（根据沉降系数） 真核生物 5S rRNA 28S rRNA 5.8S rRNA 18S rRNA 原核生物 5S rRNA 23S rRNA 16S rRNA 第六十五页，共一百二十页，2022年，8月28日 所有rRNA分子中都有大量的链内互补序列，可以形成链内碱基配对，使得rRNA高度折叠。rRNA二级结构中存在大量的茎环结构，且对同一沉降系数的不同物种来源的rRNA来说，虽然它们的一级结构同源性不同，但二级结构却非常相似。 第六十六页，共一百二十页，2022年，8月28日 4、其他小RNA及RNA组学 非mRNA小RNA（small non-messenger RNA, snmRNA)：除了tRNA,mRNA,rRNA外，）在细胞的不同部位还存在 着许多其他各类的小分子RNA，通称为snmRNA。 RNA组学（RNomics）：研究细胞中snmRNA种类、结构和功能， snmRNA表达谱的变化及其与功能的关系。 第六十七页，共一百二十页，2022年，8月28日 一、核酸的解离与溶解度 1、分子量大，两性电解质，通常表现为酸性； 2、DNA的pI为4-4.5, RNApI为2-2.5； 3、溶解性：均微溶于水；不溶于一般有机溶剂，在70%乙醇中沉淀； 4、粘度：DNA粘度大，而RNA粘度小 5、DNA对碱稳定，而RNA被稀碱水解。 第3节 核酸的理化性质 第六十八页，共一百二十页，2022年，8月28日 二、核酸的粘度 核酸粘度大小规律： DNARNA 双链DNA(dsDNA)单链DNA(SSDNA) 第六十九页，共一百二十页，2022年，8月28日 三、核酸的紫外吸收 碱基具有共轭双键，因此具有紫外吸收性质，其吸收高峰接近260nm。 DNA 紫外吸收光谱： 1．天然DNA;2.变性DNA;3．核苷酸中吸收值 吸光度 波长（nm） 第七十页，共一百二十页，2022年，8月28日 OD260的应用： 1. DNA或RNA的定量 OD260=1.0相当于 50μg/ml双链DNA 40μg/ml单链DNA（或RNA） 20μg/ml寡核苷酸 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0 含杂蛋白及苯酚，降低 3.判断DNA是否变性 在DNA的变性过程中，光吸收值增大（增色效应） 在DNA的复性过程中，光吸收值减小（减色效应） 第七十一页，共一百二十页，2022年，8月28日 四、核酸的变性、复性及杂交 核酸变性指核酸双螺旋区碱基对间的氢键断裂，空间结构破坏，形成单链无规则线团状态的过程。 降解：核苷酸骨架上3’，5 ’-磷酸二酯键的断裂 DNA变性的本质是双链间氢键的断裂 1、变性（denaturation） 第七十二页，共一百二十页，2022年，8月28日 核酸变性后，260nm的紫外吸收值明显增加，称增色效应。 加热DNA的稀盐溶液，达到一定温度(80～100℃)后，核酸即发生热变性。热变性是核酸的重要性质。 热变性DNA缓慢冷却的过程，称退火。 核酸变性后，浮力密度增高、粘度降低、生物活性降低或丧失、酸碱滴定曲线改变。 第七十三页，共一百二十页，2022年，8月28日 指增色效应达50%时的温度 一般DNA Tm 值在85 - 90 ?C之间 Tm：DNA变性时，OD260达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度或融解温度(Tm)。 大小与G+C含量成正比。 第七十四页，共一百二十页，2022年，8月28日 均一性高，变性的温度范围越窄 。 Tm值大小与下列因素有关： （1）DNA的均一性： 第七十五页，共一百二十页，2022年，8月28日 测定Tm，可推知G-C含量。 G-C%=（Tm-69.3）×2.44 （2）