TEAD4与子宫颈鳞状细胞癌增殖和侵袭的关系及分子机制探讨.pdf

摘 要 摘 要 研究 目的： TEAD4 (transcriptional enhancer associate domain family member 4) 是 TEAD 转录因子蛋白家族成员之一，TEAD4 分子的转录激活结构域能与 YAP （Hippo 信号通路中主要的共激活因子）相结合，形成转录调控复合体，调控下游肿瘤 生长侵袭相关基因的转录。目前已发现，TEAD4 与胃癌、肺腺癌、口腔鳞癌等 多种恶性肿瘤的不良生物学行为相关，且有研究表明，人乳头瘤病毒 16 型（human papilloma virus ，HPV16 ）诱导的角质细胞中存在TEAD4 的高表达，但关于TEAD4 与子宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma, CSCC) 的关系目前尚未见 报道。 本课题旨在探讨 TEAD4 与 CSCC 增殖和侵袭的关系，并对其调节通路进行 初步研究，为 CSCC 的临床诊疗以及开发新的分子靶标提供科学依据。 方法： 1. 生物信息学技术分析：应用 TCGA 数据库分析 TEAD4 和 MMP9 在宫颈 癌组织和正常组织的表达差异，利用在线数据库 GEPIA，根据pearson 相关性分 析TEAD4 与MMP9 基因的相关性，利用OncoLnc 在线数据库，采用Kaplan-Meier 分析 TEAD4 的表达对宫颈癌患者生存率的影响。 2. 临床病理标本分析：收集 2011 年至 2019 年南昌大学抚州医学院附属医 院确诊的 CSCC 肿瘤病理标本 50 例作为研究对象，慢性宫颈炎患者宫颈病理标 本 20 例作为对照组；免疫组织化学 MaxVisionTM 法检测患者石蜡标本肿瘤组织 和对照组宫颈组织中 TEAD4、MMP9 的表达情况，分析 TEAD4 在 CSCC 和慢 性宫颈炎组织中的表达差异，CSCC 组织中 TEAD4 和 MMP9 的表达与临床病理 参数之间的关系，以及 TEAD4 和 MMP9 的相关性。 3. 细胞实验：子宫颈鳞状细胞癌 SiHa 细胞分为 control 组、vector 组、 pCMV3-TEAD4 转染组， 应用 脂质体 Sinofection 分别进行对照质粒、 pCMV3-TEAD4 质粒转染，Western blotting 检测各组细胞 TEAD4、MMP9 和磷 酸化 ERK 蛋白表达水平；CCK8 法检测细胞增殖；Transwell 小室实验检测细胞 侵袭。 I 摘 要 4. 机制研究：ERK 抑制剂 U0126 预处理 SiHa 细胞后，进行 TEAD4 基因瞬 时转染，Western blotting 检测细胞中 ERK 、磷酸化 ERK 和 MMP9 表达水平的变 化。 结果： 1. 通过 TCGA 数据库分析发现 TEAD4 和 MMP9 在宫颈癌组织中均呈高表 达（P 0.05 ），利用在线数据库GEPIA，根据pearson 相关性分析发现 TEAD4 与 MMP9 基因呈正相关（R=0.17 ，P 0.01 ）；利用OncoLnc 在线数据库，采用 Kaplan-Meier 曲线分析TEAD4 的表达对宫颈癌患者总体生存率的影响，结果发 现低表达 TEAD4 的患者的生存率高，但差异不显著（P 0.05 ）。 2. 免疫组化方法检测组织标本中蛋白表达，并通过图像采集软件选择 3 个 代表性视野输入光密度分析软件 image pro-plus 6.0 进行光密度分析，结果显示， CSCC 组织中 TEAD4 平均表达水平（0.186 ± 0.0355 ）显著高于对照组宫颈上皮 组织（0.0494 ± 0.0105, P 0.001 ）。CSCC 组织中 MMP9 的平均表达水平（0.180 ± 0. 0310 ）显著高于对照组宫颈上皮组织（0.0608 ± 0.0211, P 0.001 ）。相关性 分析结果显示，在 CSCC 组织中 TEAD4 的表达与 MMP9 的表达呈正相关