TUBA1C在胶质瘤中的作用和机制研究.pdf

摘要 摘 要 目的： 胶质瘤是最常见的颅内恶性肿瘤，占全部原发性脑肿瘤的 81%，具有高度 增殖、高度侵袭、高度血管生成和高度代谢异常的生物学特征。目前主要治疗 手段是外科手术切除，术后辅以放化疗，但患者五年总的生存率仅为 5% 。在胶 质瘤中，探讨 TUBA1C 对脑胶质瘤细胞生物学行为的影响及其分子机制，为胶 质瘤患者的临床治疗奠定理论基础。 方法： 采用 Kaplan-Meier 生存分析、单因素、多因素 Cox 回归分析、ROC （receiver operating characteristic curve ）曲线分析等生物信息学方法筛选与胶质瘤患者预后 相关的基因 TUBA1C ，并对CGGA 数据库基因集进行 GSEA（Gene set enrichment analysis ）分析预测TUBA1C 在神经胶质瘤中的作用机制，采用 RT-PCR 和蛋白 印迹（Western Blot ）实验检测胶质瘤细胞系中的TUBA1C mRNA 和蛋白表达水 平，然后利用平板克隆形成实验、MTT 、Transwell 迁移、细胞凋亡和细胞周期 实验以进一步评估敲低 TUBA1C 对胶质瘤细胞生物学功能的影响。最后，采用 蛋白印迹实验检测细胞周期相关蛋白表达水平的变化验证 TUBA1C 通过调控细 胞周期影响脑胶质瘤细胞的增殖。 结果： 在胶质瘤中 TUBA1C 表达上调且与胶质瘤患者的不良预后有关，并且 TUBA1C 基因是胶质瘤患者的独立预后危险因素。GSEA 功能富集分析提示 TUBA1C 与细胞周期期转变和细胞周期信号传导途径的调节有关。此外，敲低 TUBA1C 能够抑制胶质瘤细胞增殖和迁移，并诱导细胞凋亡和细胞周期 G2/M 期 阻滞。 结论： 本研究结果表明 TUBA1C 的表达与胶质瘤患者的不良预后有关且通过促进 细胞周期 G2/M 期转变，从而促进胶质瘤细胞增殖。因此，TUBA1C 可能作为 胶质瘤预后的生物学分子标志物。 关键词：胶质瘤，TUBA1C ，细胞周期，细胞增殖 II 目录 目 录 第 1 章 前言 1 第 2 章 实验材料与实验方法 3 2.1 实验材料 3 2.1.1 胶质瘤数据库及数据的获取 3 2.1.2 细胞 3 2.1.3 试剂 3 2.1.4 仪器设备 4 2.2 实验方法 5 2.2.1 数据库使用 5 2.2.2 常用试剂的配制 5 2.2.3 细胞培养 6 2.2.3 Western blot 6 2.2.4 实时定量 PCR 8 2.2.4 siRNA 干扰技术 10 2.2.5 平板克隆形成实验 11 2.2.6 细胞生长曲线测定 11 2.2.7 Transwell 小室试验 11 2.2.8 细胞凋亡实验 12 2.2.9 细胞周期实验 12 2.2.10 统计学分析 13 第 3 章 实验结果 14 3.1 数据分析 14 3.2 TUBA1C 与胶质瘤患者预后不良有关 14 3.3 TUBA1C 在胶质瘤中高表达 15 3.4 TUBA1C 在 U87 、U251 细胞系中敲低效率验证 16 3.5 TUBA1C 敲低后对胶质瘤细胞增殖能力的影响 17