2023届全国新高考生物冲刺复习 PCR扩增技术原理与过程.pptxVIP

;01. PCR实验原理;过程：;;; 02.PCR实验操作;（1）按配方将所需试剂摆放在实验桌上（准备） （2）用微量移液器按配方在微量离心管中依次加入各组分（移液） （3）盖严离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁（混合） （4）将微量离心管放在离心机上（离心） （5）将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的循环程序（反应）;（1）理论上DNA扩增数目的计算;;2 、过程 ;50：在厚度为1cm比色杯中的吸光值为1, DNA 的含量为50?g /mL;PCR技术的操作过程;1.成功扩增出DNA片段的判断依据是什么？ 2.进行电泳鉴定的结果应该是几条条带？ 3.如图所示，该片段大小约为____bp ;体内DNA复制与PCR的技术扩增DNA有什么区别？;03.体内DNA复制与PCR的技术区别; DNA的复制需要RNA引物,这是由DNA聚合酶和RNA聚合酶的特性决定的.DNA聚合酶不能从头合成DNA（需要引物DNA or RNA）,因为DNA聚合酶具有高保真系统,这个系统要求,在新链的延伸过程中,只有新添加的碱基与模板链形成双螺旋才能继续链的延伸,否则延伸终止,启动切除修复机制,直至添加正确的碱基,也即是在DNA聚合酶的上游位置一定要互补形成双链（可以是RNA-DNA）才能继续下游DNA的合成,这是它的忠实性和高保真系统决定的.而RNA聚合酶可以从头合成RNA,合成的RNA游离在模板外,不需要与模板形成互补配对的双螺旋结构就能继续下游的合成.两种酶的不同机制决定了DNA复制时用的只能是RNA引物. ;PCR反应中所用到的DNA引物,是用化学法人工合成的,与模板形成双链后在DNA聚合酶的作用下就可以继续链的延伸；而在体内,由于DNA聚合酶的忠实性,不能从头合成DNA,因此只能采用RNA引物来延伸了.;1.PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。下列防止污染的方法中不正确的是(　　) A．将样品的处理、配制PCR反应液、PCR循环扩增及PCR产物的鉴定等步骤分区或分室进行 B．吸样枪吸样要慢，吸样时尽量一次性完成，枪头小套、小离心管应一次性使用，以免交叉污染 C．所有PCR试剂都应放置于大瓶分装，以减少重复加样次数，避免污染机会 D．PCR试剂、PCR反应液应与样品??PCR产物分开保存，不应放于同一冰盒或同一冰箱;2．DNA的复制需要引物，主要原因是(　　) A．可加快DNA的复制速度 B．引物可与DNA母链通过碱基互补配对结合 C．引物的5′端有助于DNA聚合酶的延伸DNA链 D．DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链 　;3.在进行DNA亲子鉴定时，需大量的DNA。PCR技术(多聚酶链式反应)可以使样品DNA扩增，获得大量DNA克隆分子。该技术的原理是利用DNA的半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制(如下图，图中黑色长方形是引物)。 (1)图中的变性、延伸分别是指______、__________________。 (2)假设PCR反应中的DNA模板为P，第一轮循环的产物2个子代DNA为N1，第二轮的产物4个子代DNA为N2，N1、N2中分别含有模板DNA单链的DNA分别有________个、________个。若继续循环，该DNA片段共经过30次循环后能形成________个DNA片段。;4.在进行DNA亲子鉴定时，需大量的DNA。PCR技术(多聚酶链式反应)可以使样品DNA扩增，获得大量DNA克隆分子。该技术的原理是利用DNA的半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制(如下图，图中黑色长方形是引物)。 ;5.“X基因”是DNA分子上一个有遗传效应的片段，若要用PCR技术特异性地拷贝“X基因”，需在PCR反应中加入两种引物，两种引物及其与模板链的结合位置如图1所示。经4轮循环后产物中有五种不同的DNA分子，如图2所示，其中第⑤种DNA分子有几个(　　) A．2 B．4　　　　C．6　　　　D．8