细胞攻略--293[HEK 293](人胚肾细胞)细胞培养教程.docxVIP

— — PAGE 1 — 细胞攻略--293[HEK 293](人胚肾细胞)细胞培养教程  细胞基本信息 细胞正常生长形态照片 细胞名称：293[HEK 293](人胚肾细胞)细胞别称：Hek293; HEK-293; HEK293; HEK:293; 293; 293HEK; Human Embryonic Kidney 293细胞货号：SNL-014生长特性：贴壁培养条件：DMEM+10% FBS+1% P/S培养环境：空气，95%；二氧化碳 (CO2)，5%细胞简介：293 [HEK-293]细胞人类胚胎的肾脏中分离的表现出上皮形态的细胞，后经剪切过的人腺病毒5(Ad5)转染获得的永生化细胞，细胞包含并表达转染的Ad5基因，表达玻连蛋白。早期报道中指出，293 [HEK-293]细胞基因组中含有腺病毒5(Ad5)基因组的左侧端和右侧端的DNA，但是现在明确了只存在其左侧端的DNA。经过对Ad5的插入点测序发现，Ad5的1-4344位线性核苷酸整合入293 [HEK-293]细胞19号染色体(19q13.2)。293 [HEK-293]细胞可以作为人类腺病毒载体扩增的宿主，可表达异常的玻连蛋白的细胞表面受体，由整合素1亚单位和玻连蛋白受体-v亚单位组成。293 [HEK-293]细胞可用于工业生物技术和毒理学研究，功效测试和病毒测试中也有应用。 293[HEK 293]人胚肾细胞特点 01细胞贴壁较弱细胞贴壁比较弱，因此在遇到运输低温及震荡、室温静置太长时间、添加的培养基或其他试剂过冷、密度较高、聚集未吹散、加液吹打到细胞面等情况时会出现明显的成片脱落现象，此时若脱落现象不严重应尽快放回培养基继续培养，若呈大片脱落的情况时需要收集细胞重新消化吹散并接种；建议使用经过包被或者高贴壁培养瓶培养细胞，尽量避免接触低温或密度过高；02细胞本身偏嗜酸性，消耗培养基较快细胞在略微偏酸性的环境下生长状态会比偏碱性的好，注意培养基pH控制；细胞密度达到70%以上时，培养基消耗会很快，主意及时观察并换液；03细胞生长聚集成岛状细胞呈岛状聚集生长，逐步向外侧扩散直至完全融合；04细胞聚团后很难再吹散细胞传代过程中一定要注意吹散细胞，接种密度不要过高，否则接种后细胞聚团将很难再吹散，会形成类似球状的聚集体贴壁生长，培养条件合适的情况下细胞会逐渐摊开生长，但若培养条件无法有效促进细胞贴壁，可能会长时间呈球状增殖； 细胞收 货 攻 略 #常温细胞：1.T25瓶收货后，拆开外包装，用75%酒精消毒T25瓶表面，放37℃培养箱静置2-4h；2.吸走大部分培养基并留10-12 ml，显微镜下拍照保存细胞状态照片，观察细胞密度，若细胞密度大于80%即可按比例传代（首次传代比例建议1：2），若细胞密度低于70%可以留10-12 ml继续培养至细胞密度80%以上再进行传代培养；#冻存细胞：1. 细胞收货后尽快开箱检查，若干冰充足可以取出细胞迅速置于-80℃冰箱（2-3天内复苏）短期保存或液氮中长期保存，若干冰完全挥发建议立即复苏细胞并联系销售人员解决；2. 冻存细胞建议尽快复苏一管培养检查，以免超出售后期，复苏步骤参考复苏攻略；3.复苏一管细胞出现异常及时联系销售人员，在专业技术支持的指导下进行下一步操作；Tips：1.细胞收货出现漏液、培养瓶破损、干冰完全挥发等异常情况时，及时拍照联系销售人员；2.该细胞贴壁生长，T25瓶运输过程中经常出现大量细胞脱落并聚团的情况，细胞脱落建议按以下步骤处理：收货发现细胞脱落聚集，可以将所有细胞收集起来，在50ml离心管内离心，上清保存备用，再用PBS重悬细胞，尽量吹散后离心弃上清。沉淀用1ml胰酶重悬，放37度消化2min，先轻轻吹散细胞，再加4ml左右完全培养基终止消化吹散细胞至无肉眼可见团块，离心弃上清，加第一步保存的培养基重悬后接种到新的培养瓶。由于贴壁较弱细胞消化时间本身较短，注意必须控制消化时间和吹打力度，避免细胞消化或吹打死亡过多导致无法正常贴壁生长。由于运输会脱落的细胞本身贴壁较弱，建议使用高贴附培养瓶或提前包被过的培养瓶培养细胞。3.尚恩生物T25瓶发货的细胞内含对应细胞的完全培养基，可以收集原装培养瓶内培养基经1500rpm离心5min后，取上清于4℃保存用于后续细胞培养； 细胞传 代 攻 略 1、先尽量吸干净T25瓶原培养基，再加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；2、T25瓶加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层，将培养瓶放入37度培养箱消化；3、消化到细胞间隙变大，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消；4、混匀细胞，900rpm离心3-