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序 言 组织培养概论 一、基本概念 1、植物组织培养：是指将植物的离体器官（如根、茎、叶、花、果实、种子等、）组织（如 花药、胚珠、形成层、皮层、胚乳等）、细胞（如体细胞、生殖细胞花粉等）以及去除细胞 壁的原生质体，放在人工控制的环境和离体无菌条件下，在人工配制的培养基上对其进行克 隆，使其生长、分化并成长为完整植株的过程。由于是在离体条件下进行的，故又可称为离体培养。 2、组织、器官或细胞培养：指利用生物体各部分组织、器官或细胞进行离体培养，使之形成愈伤组织或完整有机体的技术。 3、原生质体培养：指将微生物或植物细胞游离成原生质体，在适宜培养条件下，依据细胞全能性使其再生细胞壁，并进行细胞分裂分化，形成完整个体的技术。 二、组织培养的特点 1、植物基础学科研究的良好系统 与植物学、细胞生物学、生物化学、植物生理学、微生物学、植物遗传育种、生物制药等课程密切相关，为各学科的研究提供了基础知识、理想的离体研究条件。 2、生物技术的基础 21 世纪是生命科学的世纪，而生命科学的巨大作用是要依靠新的技术方法的推动才得以实现。新技术：生物技术；核心是植物基因工程，基础是植物组织培养。 3、经济高效、管理方便、利于自动化 场所一定；温度、湿度、光照等条件一定；试验和生产均微型化和精密化；便于实现流水作业；利于生产管理；避免微生物的干扰与破坏。 4、技术含量高、试验误差小、人工控制能力强 外界影响小；条件基本均一；全年时间都可试验与生产；处理间误差小。 5、生长周期短、生长速度快、试验重复性好 人工控制，缩短大量时间；工厂化大生产；苗木优质，技术先进；较少受外界条件影响， 试验重复性好。 6、实验材料经济、来源单一 实验材料的遗传性是否一致，决定实验是否成功；来源单一，遗传背景一致；取材少， 培养效果好；繁殖快。 7、缺点 设备复杂、投入资金多、电能消耗大；对人员技术要求高；对试验场所要求高。三、组织培养方法 根据培养方式不同，可以分为固体培养和液体培养；根据培养物量的多少，可以分为大 量培养和微量培养；根据培养过程中是否需要光，可以分为光培养和暗培养；根据培养方法 的不同，可以分为平板培养、微室培养、悬浮培养和单细胞培养等；根据培养器官的不同， 可以分为花药培养、胚珠培养、根培养和茎尖培养等。总之，植物组织培养的分类方法很多， 但无论哪种方法均为在无菌条件下的离体培养。 四、研究内容 研究离体培养条件下，细胞或器官所需要营养条件和环境条件；细胞或组织器官的形态 发生规律；植物材料的快速大量繁殖；细胞融合方法和机理；再生个体的遗传和变异；种质 资源的离体保存机理和方法；动物克隆技术原理等；改良生物品种，创造新的生物种类，为人类造福。 五、植物组织培养的生理依据 依据是细胞全能性（cell totipotengcy）学说。 其内容为：植物体的每一个细胞都携带有一套完整的基因组，并具有发育成为完整植株的潜在能力。 六、植物组织培养的发展 植物组织培养的整个发展历史可以追溯到19 世纪末 20 世纪初，根据其发展情况，大体可分为三个时期。 1、萌芽探索时期 1839 年 Schwann 和 Schleiden 提出细胞学说时指出：“每一个细胞应该可以独立生活和发展，假如具有的条件正如它存在于有机体一样。”1889 年，Ljunggren 将人体皮肤保存在腹水中几天至几周后再做移植手术获得成功；1902 年，德国植物生理学家 Haberlandt 根据理论提出：高等植物的体细胞，可以不断分割，直至单个细胞的观点。1904 年，Hanning 在无机盐和蔗糖溶液中培养了萝卜和辣根菜的胚获得成功，证实了上述观点。虽然早期的细胞培养实验比较简单，但是，这些实验证明了可以在人工条件下对细胞进行离体培养。 2、培养技术建立时期 在萌芽探索时期的基础上，人们对离体培养的组织或细胞进行了大量的研究，从而为其快速发展和应用奠定了基础。1934 年，美国植物生理学家 White 培养番茄的根，建立了活跃生长的无性繁殖系，并能进行继代培养。这些根系的培养，使人们获得了光、温、pH、培养基组成对其影响的参数，为以后技术的成熟奠定了基础。1943 年，White 提出了植物细胞 “全能性”学说，从而使组织培养成为一门新兴的学科。 3、迅速发展时期 20 世纪 60 年代以后，组织培养得以快速的发展，不同生物的研究成果层出不穷，并广泛的应用于生物学和农业科学，在生产中发挥了巨大的作用。 1960 年，英国学者 Cocking 用真菌（fungi）纤维素酶（cellulase）酶解分离番茄根和烟草原生质体获得成功，开创了植物原生质体培养和体细胞杂交工作，这是植物组织培养的重 大发现之一。同年，Morel 提出了利用茎尖离体快速无性繁殖兰花的方法，不仅繁殖系数高， 而且能