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PAGE2 / NUMPAGES2 HPLC各种压力和基线问题全面解析 做液相实验的时候是不是总会用到各种压力问题和基线问题，高了，低了，堵了，漏了，飘了看看导致这些问题的原因。 液相色谱压力异常? ? 液相系统压力产生的原因在于流动相流经管路及色谱柱时会有阻力，即所谓的反压或系统压力。漏液会引起系统压力的降低，而堵塞会引起系统压力的飙升。系统压力的单位有：巴（Bar）、兆帕（Mpa）和磅／平方英吋（psi），它们之间的换算关系为１Bar＝0.1Mpa＝14.5psi。 １、影响因素影响系统压力的因素主要有流动相的溶剂组成、温度及流速这三方面：（1）流动相的粘度是产生反压的主要原因，下图为有机溶剂－水的粘度随组成与压力的关系图：由上图可以看到，乙腈－水比例为（20:80）、甲醇－水比例为（40:60至50:50）时，系统的压力最大。因此，在做实验时应尽量避开这个比例范围。另外，异丙醇粘度大，一般不作流动相使用。（2）流速对反压的影响是线性关系，流速增加，反压亦增大。（3）温度对反压的影响是反比关系，温度升高，反压降低，对某些流动相的影响更大一些。（4）液相色谱仪各模块之间的连接管路也会产生压力，系统压力与管路的长度成正比，与管路直径的四次方成反比（1/4D）。 上述考虑的是柱外因素对系统压力的影响，色谱柱对系统压力的影响也很大，反压与色谱柱长度成正比，与填料颗粒度的平方成反比（2.5μｍ填料比3.5μｍ填料反压高）。 ２、压力原因具体到压力问题的表现形式上，主要有压力高、压力低或没有压力以及压力不稳：造成压力高问题的主要原因有：（1）温度太低；（2）流速太高；（3）流动相粘度大；（4）管路堵塞；（5）仪器或色谱柱堵塞；（6）压力传感器问题。系统压力高的故障排除流程图如下：（可点击图片放大查看） 产生压力低情况的可能原因：（1）系统内有渗漏处；（2）单向阀堵塞；（3）入口管路有气泡；（4）溶剂滤头堵塞；（5）所用溶剂不正确，储液瓶中无溶剂；（6）温度太高，流速太低；（7）泵未输送流动相；（8）泵关闭或保险丝断了。以上为仪器单向阀的结构示意图，如果某些原因造成宝石球与球基座发生黏结，造成液体不能进入到泵中，从而造成泵的压力偏低。 ３、造成压力波动可能的原因有：（1）脱气机排气不充分；（2）流动相未正确脱气；（3）所用溶剂不混溶或易挥发；（4）压力传感器及泵问题。其中，大多数的压力波动都是由于气泡引起的（如下图）： 基线噪音问题１、基线噪音大（1）流动相中有气体–溶剂脱气；（2）流动池中有气泡–在出口处使用0.009”的管路；（3）色谱柱上的污染物被洗脱–平衡系统，直至基线稳定；如样品中有保留非常强的组分，可设置强洗脱程序；（4）渗漏–此时应修复渗漏，重新连接或更换接头；（5）检测器灯能量低–更换灯；（6）灵敏度太高–使用合适的采样频率，调节增益（如ELSD检测器）；７）检测器流动池脏–清洁流动池；（8）电噪音–除去电噪音的来源：屏蔽电缆，清洁触点；（9）采样频率设置过大–一味追求高采样频率，可能对灵敏度没有任何帮助，同时也会产生比较大的噪音：UV检测器推荐降低采样频率，HPLC推荐1-5Hz，UPLC推荐20Hz。 2、同步的基线噪音（1）大多数情况下都是泵引起的，泵头中存在空气–将溶剂脱气，并重新灌注泵；（2）单向阀问题–超声清洗单向阀或更换；（3）柱塞杆断裂–更换；（4）混合问题–更换一个体积更大的Mixer，以增加系统体积；（5）电噪音–改变电路，除去来源。 ３、不同步的基线噪音（1）气泡—流动相要脱气；（2）检测器中有气泡／空气—流动相脱气，或在检测器的后面加反压（不适用于RI检测器）；（3）渗漏—特别是肉眼无法发现的微漏或者泵的内漏，会造成流速的变化和混合比例的变化，从而导致基线噪音，此时应修复渗漏，重新连接或更换接头；（4）管路堵塞—除去堵塞，冲洗系统；（5）电噪音—除去来源，改变电路。 ４、基线漂移：上漂或者下漂（1）梯度变化引起，如溶剂Ｂ的吸收值高于溶剂Ａ–使用基线差减，或尝试新的流动相；（2）化合物从色谱柱上洗脱–平衡系统，直至基线稳定；如样品中有保留非常强的组分，可设置强洗脱程序；（3）溶剂改变（气体吸附，蒸发）–氦气脱气，隔离溶剂；（4）溶剂渗漏–拧紧或者更换接头；（5）检测器温度影响（尤其是示差，电化学以及电导检测器）–流动池温度调节；（6）柱温波动–等待柱温平稳，使用柱预加热器；（7）压力变化–过滤溶剂以及样品，或样品太粘稠；（8）混合问题–更换一个体积更大的Mixer，以增加系统体积。 ５、Cyclic基线（1）温度影响–隔离热源，或搬离临近的通风口，或增加流动池温度；（2）混合问题–更换一个体积更大的Mixer，以增加系统体积；（3）流动相中的气体–溶剂脱气；（4）泵不稳定–检查维修泵；（5）管路堵