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分子生物学工具酶第1页/共38页 4/29/2023　 工具酶是一类用于DNA重组过程中不同DNA分子的制备、切割、修饰、扩增, 核酸分子的标记以及它们的核苷酸序列测定的酶。概 述分类： 限制性内切酶 连接酶 逆转录酶 DNA、RNA聚合酶 其它酶类 大多数来自不同的微生物和噬菌体 少数酶来自动物和动物病毒 另一些工具酶编码的基因也被克隆出来, 并用大肠杆菌细胞来生产这些工具酶。第2页/共38页 4/29/2023一、限制性内切酶5-G^A A T T C-3 3-C T T A A^G-5EcoRI#E#ER0272 5x5000u#ER0273 H,25000u市场容量：1.5亿美金第3页/共38页 4/29/2023其命名以该酶来源的原核生物的名称为依据。 第一个大写字母：取自于属名的第一个字母 第二、三个小写字母：取自于种名的前两个字母 字母后面罗马字：该种生物中不同限制酶分离先后顺序限制酶名称的前三个字母常用斜体或加下横线表示限制酶的命名 分离纯化：几千种限制性内切酶 商品化：200多种限制性内切酶限制酶的种类第4页/共38页 4/29/2023限制性内切酶第5页/共38页 4/29/2023兰白反应推荐缓冲液作用最适温度作用产物连接效率星号活性GC甲基化末端失活高浓度Genome Qualified限制性内切酶说明书第6页/共38页 4/29/2023Fermentas公司30多年研发生产历史，提供200多种高质量的工具酶通过ISO9002国际质量体系认证 精湛的实验室研发技术和实力 具有全球第二大的产限制酶的菌株 (2500株)库 REBASE 中30% 限制酶经过Fermentas的鉴定 30%II型限制－修饰相关基因在Fermentas得到克隆 全球率先合成了“人造”酶(Eco57MI, N.Bpu10I)生产中执行最高级别的生产标准（LO Test）致力于通过提高生产效率从而提升产品质量和价格竞争力全球限制性内切酶(REs)生产的领先企业市场份额：20％左右，个别国家超过30％的市场占有率第7页/共38页 4/29/2023执行最严格生产标准 – PureExtreme?自 1996 年以来，只有Fermentas始终执行分子生物学产品生产中最严格的纯度标准 –— “标记寡核苷酸测试”（ the Labeled Oligonucleotide test，”LO” test）独有的“标记寡核苷酸测试” 确保 Fermentas 产品达到 PureExtreme?级别在限制酶、 dNTPs、 DNA/RNA 修饰酶等的生产中都进行了 “标记寡核苷酸测试” 传统分析方法包括：非特异性核酸酶内切分析、核酸外切酶分析、连接－重切分析、蓝白斑筛选分析等。 但是要检测痕量污染的内切、外切核酸酶，磷酸酶，必需选择更高灵敏度的检测方法：LO Test第8页/共38页 4/29/2023Labeled Oligonucleotide (LO) test A – Invitrogen B – Roche C – NEB  D – Stratagene E – Promega F – Fermentas 第9页/共38页 4/29/2023不同供应商RE LO检测分析-purecontaminatedminor contaminationX*第10页/共38页 4/29/202319962001通过LO检测的REs(%) RocheInvitrogen NEBStratagene PromegaFermentas第11页/共38页 4/29/2023PureExtreme? 限制性内切酶优势所有Fermentas内切酶都达到 PureExtreme?（致纯） – 最高品质保证产品投诉少严格的批间一致性 保证产品质量稳定性 几乎所以的酶都采用标准浓度 – 10 units/μl实时质量监督第12页/共38页 4/29/2023所有Fermentas RE在优化Buffer中有100%活性Easy-to-use Five Buffer Plus System每个Fermentas RE含两种buffer：- 颜色区分，优化buffer： blue (B+) green (G+) orange (O+) red (R+) yellow (Y+/Tango?)和- Univers