实验7-皮肤刺激实验-20121129.docxVIP

实验八皮肤刺激实验 皮肤毒作用的类型: 接触性皮炎、光毒性、光敏作用、皮肤 肿瘤、尊麻疹、异常色素、痙疮等。 皮肤毒性检测方法: 皮肤黏膜刺激试验、皮肤致敏和光敏试 验、皮肤接触性尊麻疹试验、皮肤致癌 试验等。 皮肤刺激性： 皮肤涂敷受试物后局部产生的可逆性炎 性变化。刺激是不涉及免疫学机制的一次、 多次或持续与试验材料接触所引起的局部炎 症反应。 皮肤变态反应（过敏性接触性皮炎）： 皮肤对一种物质产生的免疫源性皮肤反 应。在人类这种反应可能以瘙痒、红斑、丘 疹、水疱、融合水疱为特征。动物的反应不 同，可能只见到皮肤红斑和水肿。 化妆品卫生规范 中华人民共和国卫生部2007. 01 规定化妆品原料的检测一般需进行下列毒理学试验: 急姓经口和急姓经皮毒姓试验； 皮肤和急性眼刺激性/腐蚀性试验; 皮肤变态反应试验； 皮肤光毒性和光敏感试验(原料具有紫外线吸收特性需做); 致突变试验(至少应包括一项基因突变试验和一项染色体畸变试 (6 )亚慢性经口和经皮毒性试验; (7 )致畸试验； 慢性毒性/致癌性结合试验; 毒物代谢及动力学试验*; W原料的特姓和用途，还可考虑其它必要的试验。 实验目的: 1.确定和评价化学物对哺乳动物皮 肤局部是否有刺激作用及其程度。 2. 了解化妆品原料及其产品安全性 毒理学检测方法。 3.确定重复接触化妆品及其原料对 3.确定重复接触化妆品及其原料对 if 哺乳动物是否可引起变态反应及其 程度。 实验原理: 1?将受试物一次（或多次）涂敷于受试动物 的皮肤上，在规定的时间间隔内，观察动物 皮肤局部刺激作用的程度并进行评分。 2.采用自身对照，以评价受试物对皮肤的刺 激作用。 3-急性皮肤刺激性试验观察期限应足以评价 该作用的可逆性或不可逆性。 实验材料： 剃毛器、剪毛剪、记号笔、医用胶带、称量纸、洗瓶、大烧杯、 棉签、静脉注射针头（5号或7号）、 一次性静脉注射器、麻醉剂（戊巴比 妥钠或其他）、兔子保定器等。 实验方法： ?实验动物和饲养环境 多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白 色家兔（皮肤变态反应实验多选用豚鼠）；应使 用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性 均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的；实验 动物至少要用4只，如要澄清某些可疑的反应则需 增加实验动物数；实验动物应单笼饲养，试验前 动物要在实验动物房环境中至少适应3d时间；实 验动物及动物房应符合国家相应规定；选用常规 饲料，饮水不限制，豚鼠需注意补充适量Vc。 ?受试物 液体受试物一般不需稀释，可直接使用原液； 固体试物，应将其研磨成细粉状，并用水或其它 无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有 良好的接触；使用其它溶剂，应考虑到该溶剂对 受试物皮肤刺激性的影响；需稀释后使用的产品 ,先进行产品原型的皮肤刺激性试验，如果试验 结果显示中度以上刺激性,可按使用浓度为受试 结果显示中度以上刺激性, 可按使用浓度为受试 物再进行皮肤刺激性试验。 ?急性皮肤刺激性试验步骤: ①试验前约24h,将实验动物背部脊柱两侧 毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各 约3cm x 3cmo ②取受试物约0. 5mL ( g )直接涂在皮肤上, 然后用二层纱布(2. 5cm x 2. 5cm)和一层玻 璃纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷 带加以固定。另一侧皮肤作为对照。采用封 闭试验，敷用时间为4h。对化妆品产品而言, 可根据人的实际使用和产品类型，延长或缩 短敷用时间。对用后冲洗的化妆品产品，仅 采用2h 采用2h敷用试验。试验结束后用温水或无刺 III 激性溶剂清除残留受试物。 如怀疑受试物可能引起严重刺激或腐 如怀疑受试物可能引起严重刺激或腐 蚀作用，可采取分段试验，将三个涂布受试 物的纱布块同时或先后敷贴在一只家兔背部 脱毛区皮肤上，分别于涂敷后3min、60min 和4h取下一块纱布，皮肤涂敷部位在任一 时间点出现腐蚀作用，即可停止试验。 ③ 于清除受试物后的1、24、48和72h观察 涂抹部位皮肤反应，按表1进行皮肤反应评分, 以受试动物积分的平均值进行综合评价，根 据24、48和72h各观察时点最高积分均值, 按表2判定皮肤刺激强度。 @ 观察时间的确定应足以观察到可逆或不可 逆刺激作用的全过程，一般不超过14d。 表 表1:皮肤刺激反应评分 皮肤反应 积分 红斑和焦痂形成 无红斑 0 轻微红斑（勉强可见） 1 明显冬斑 2 中度一重度红斑 3 严重红斑（紫红色）至轻微焦痂形成 4 水肿形成 无水肿 0 轻微水肿（勉强可见） 1 轻度水肿（皮肤隆起轮廓清楚） 2 中度水肿（皮肤隆起约） 3 重度水肿（皮肤隆起超过，范围扩大） 4 最高积分 8 表 表2：皮肤刺激强度分级 积分均值 0. 5 ? 2. 0 2. 0 ? 6. 0