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(19)中华人民共和国国家知识产权局 *CN102367488A*
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 102367488 A
(43)申请公布日 2012.03.07
(21)申请号 201110289047.0
(22)申请日 2011.09.26
(71)申请人 浙江大学
地址 310027 浙江省杭州市西湖区浙大路
38 号
(72)发明人 吴亦栋 尚世强 杜立中 陈志敏
(74)专利代理机构 杭州求是专利事务所有限公
司 33200
代理人 张法高 赵杭丽
(51)Int.Cl.
C12Q 1/70 (2006.01)
C12Q 1/68 (2006.01)
C12R 1/93 (2006.01)
权利要求书 1 页 说明书 6 页
序列表 2 页 附图 2 页
(54)发明名称
肠道病毒三联实时荧光定量RT-PCR 检测试
剂盒
(57)摘要
本发明提供一种肠道病毒三联实时荧光定
量RT-PCR 检测试剂盒，包含：定量RT-PCR 反应
液、标准品、对照品，其中定量RT-PCR 反应液含有
RT-PCR 缓冲液、MgCl2、dNTPs、EV 通用引物、EV 通
用型荧光探针、EV71 型荧光探针、CA16 型荧光探
针、耐热DNA 聚合酶、反转录酶。本发明试剂盒通
过一步法同时对肠道病毒通用型、肠道病毒71 型
和柯萨奇病毒A 组16 型进行检测分型，比现有的
单个检测试剂盒，不仅节约了生产成本和检测成
本，同时也提高了检测的效率和时间。并在保证没
有多对引物竞争的条件下随机自动的达到多通道
的检测目的，达到效率和技术的统一。
A
8
8
4
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3
2
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1
N
C
CN 102367488 A 权 利 要 求 书
CN 102367496 A 1/1 页
1.一种肠道病毒三联实时荧光定量RT-PCR 检测试剂盒，由定量RT-PCR 反应液（1）、标
准品（2）、阳性对照品（3）、阴性对照品（4）和盒体（5）组成，其中定量RT-PCR 反应液（1）有
RT-PCR 缓冲液、MgCl 、dNTPs 、EV 通用引物、EV 通用型荧光探针、EV71 型荧光探针、CA16
2
型荧光探针、耐热DNA 聚合酶、反转录酶，
检测用上游引物序列为： 5`- CCCTGAATGCGGCTAATCC -3`
检测用下游引物序列为： 5`- GATTGTCACCATAAGCAGCC-3`
EV 通用型荧光探针序列为：5`FAM--ACACGGACACCCAAAGTAGTCG–3`BHQ-1
EV71 型荧光探针序列为： 5`HEX--CACACGCCCACAAGCCAGC–3`BHQ-1
CA16 型荧光探针序列为： 5`ROX--CACGCACCCTCAACCCAGG–3`BHQ-2
标准品序列为：
CCCTGAATGC GGCTAATCCC ACGCACCCTC AACCCAGGCA
ACTGCGGAGC ACACGCCCAC AAGCCAGCGG GTAGTGTGTC
GTAACGGGCA ACTCTGCAGC GGAACCGACT ACTTTGGGTG
TCCGTGTTTC CTTTTATCTT TATATTGGCT GCTTATGGTG ACAATC
阴性对照为无菌注射用水样品，阳性对照为EV71
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