大肠埃希氏菌重点.pptxVIP

大肠埃希菌检查大肠埃希菌〔Escherichia coil〕即大肠杆菌，为肠杆菌科埃希菌属的模式种。大肠埃希菌是人和温血动物肠道内的栖居菌，随粪便排出体外。在药品中检出大肠埃希菌，说明该样品受到人和温血动物粪便的污染，即可能是污染肠道病原体。大肠埃希菌除普通大肠埃希菌外，还有致病性大肠埃希菌，可引起婴幼儿、成人爆发性腹泻。为了保证人体健康，口服给药制剂必须检查大肠埃希菌。第二页，共二十七页。标准?中国药典?〔2022年版〕二部口服给药制剂细菌总数每1ml不得过100cfu霉菌和酵母菌总数每1ml不得过100cfu大肠埃希菌总数不得检出第三页，共二十七页。序号品名规格数量备注1锥形瓶250ml42刻度吸管10ml23刻度吸管1ml14烧杯250ml15量筒100ml16胆盐乳糖培养基100ml3装锥形瓶7pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液150ml1装锥形瓶灭菌参数：121℃、20min第四页，共二十七页。备料单〔增菌培养〕操作过程1ml10ml10ml菌悬液10ml样品供试液90ml阳样10ml阴BL培养基BL培养基BL培养基稀释液培养温度：36℃培养时间：18~24h〔必要时可延长至48h〕第五页，共二十七页。备料单〔快速生化试验〕序号品名规格数量备注1刻度吸管1ml32试管中43MUG培养基5ml4分装到试管中4靛基质————灭菌参数：115℃、20min第六页，共二十七页。阴样阳0.2ml0.2ml0.2ml阴样阳本底靛基质试验紫外荧光操作过程培养温度：36±1℃培养时间：18~24h第七页，共二十七页。备料单〔别离培养〕序号品名规格数量备注1EMB或麦康凯琼脂培养基60ml1置皿2平皿——3灭菌参数：121℃、15min第八页，共二十七页。样阳阴接种环（四区划线法）EMB或麦康凯琼脂培养基操作过程培养温度：36±1℃培养时间：18~24h第九页，共二十七页。生化试验中MUG在紫外等下显荧光的原理大肠埃希氏菌是指能产生β-半乳糖苷酶分解ONPG使培养液呈黄色，能产生β-葡萄糖醛酸酶分解MUG使培养液在波长366nm紫外光下 产生荧光的细菌。第十页，共二十七页。BL培养基配方〔每升〕：胨　20.0g 提供碳氮源 乳糖??5.0g 可发酵的糖类 氯化钠?5.0g 维持均衡的渗透压 磷酸氢二钾4.0g 缓冲剂磷酸二氢钾1.3g去氧胆酸钠/牛胆盐0.5g/2.0?g 选择性抑菌剂 第十一页，共二十七页。使用方法1、称取本品35.8g，参加蒸馏水或去离子水1?L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，每瓶100mL，121℃灭菌20min，待冷至常温后，备用。2、样品的处理。略。3、取胆盐乳糖增菌液3份，2份分别参加规定量的供试液，其中一份参加对照菌50～100个作阳性对照，第三份参加与供试液等量的稀释液作阴性对照。4、将三角瓶放入30～35℃恒温培养箱内培养18～24h。必要时可延长至48h。5、观察结果。阳性对照应生长良好，阴性对照应无菌生长。质量控制：本品质控菌株接种后，于36±1℃培养18～24h，培养结果肉汤呈混浊。第十二页，共二十七页。MUG培养基配方〔每升〕：胰蛋白胨?20.0g 提供碳氮源 3号胆盐?1.5g 抑制革兰氏阳性菌 乳糖5.0g 可发酵的糖类 磷酸氢二钾4.0g 缓冲剂 磷酸二氢钾?1.5g氯化钠5.0g 维持均衡的渗透压 MUG0.05g第十三页，共二十七页。使用方法1、称取本品37.05g，参加蒸馏水或去离子水1?L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于带有小倒管的试管中，115℃高压灭菌20min，待冷至常温，备用。2、将总大肠菌群多管发酵法初发酵产酸或产气的管进行大肠埃希氏菌检测。用烧灼灭菌的金属接种环或无菌棉签将上述试管中液体接种到EC-MUG肉汤管中。3、将已接种的EC-MUG管在培养箱或恒温水浴中44.5±0.5℃培养24h±2h。如使用恒温水浴，在接种30min内进行培养，水浴箱的液面应高于EC-MUG肉汤液面。4、观察结果：将培养基管置366nm紫外灯下约5cm处，以未接种培养物的EC-MUG培养基作空白对照，观察有无蓝白色荧光。空白对照管应无蓝白色荧光，试验管出现蓝白色荧光为阳性反响。 质量控制：大肠埃希菌菌株接种后于36±1℃培养18~24h，结果产气，紫外灯下显荧光。 第十四页，共二十七页。EMB琼脂培养基配方〔每升〕：胨??　10.0g