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实验2分离以尿素为氮源的微生物2 第1页/共14页 实验2 分离以尿素为氮源的微生物 第2页/共14页 一.实验原理 尿素 NH3 中性 碱性 酚红颜色： (酸性)黄色 红色 (变色范围 pH6.4-8.2) 第3页/共14页 二.实验目的 使用以尿素为唯一氮源的培养基分离细菌(有脲酶) 通过指示剂（酚红）颜色的变化检知培养基pH的变化(脲酶催化的化学反应) 第4页/共14页 三.实验步骤 ２.倒平板 ３.制备一定浓度梯度的细菌悬液 １g土壤＋９９ml无菌水，振荡，为１０-2稀释液，依次制备１０-3、１０-4、１０-5的土壤稀释液。 ４.稀释涂布分离法分离细菌 １.制备无菌的ＬＢ固体培养基和尿素固体培养基P26 ５.培养观察（倒置，37℃ 24-48h） （无菌，0.1ml，玻璃刮刀） 第5页/共14页 配制培养基 尿素培养基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g 酚红 0.25g 尿素 10ml 选择培养基 实验组 为什么用琼脂糖代替琼脂？怎么获得无菌的尿素溶液？ 第6页/共14页 接种 取0.1ml菌悬液 第7页/共14页 涂布分离 第8页/共14页 涂布分离 第9页/共14页 37℃倒置培养 按浓度捆成一摞 恒温37℃培养 第10页/共14页 1、为什么要用琼脂糖代替琼脂配置固体培养基 因为琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物。如果用琼脂固化培养基，会为细菌提供一定量的非尿素类氮源，这样会在尿素固体培养上产生大量以非尿素为氮源的细菌，不利于以尿素为氮源的细菌的筛选，故用纯化的琼脂糖而不用琼脂做固化剂 思考题： 第11页/共14页 2、有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用 土壤中的尿素在较高温度下会被水解成氨，氨使土壤碱化，氨还与SO42-等离子形成化合物，使土壤板结。而脲酶的细菌不仅使动植物尸体降解，而且利用了所形成的氨，有利于自然界中氮的循环。 第12页/共14页 3、有脲酶的细菌菌落周围为什么有着色的环带出现。 细菌向胞外分泌脲酶，使培养基中尿素水解，水解后产生氨，氨为碱性，酚酞在酸性环境里呈黄色，碱性里呈红色。培养基中酸碱指示剂产生颜色变化（变红），标志着存在脲酶水解尿素的作用，从而证明这一菌株以尿素为氮源。 第13页/共14页 感谢您的欣赏 第14页/共14页