DB32-T 3771-2020渔业养殖用水中喹诺酮类抗生素测定 液相色谱-串联质谱法.docxVIP

DB32/T 3771—2020 PAGE 7 DB32/T XXXX—2020 PAGE 6 渔业养殖用水中喹诺酮类抗生素测定 液相色谱-串联质谱法 范围 本标准规定了渔业养殖用水中16种喹诺酮类抗生素残留量的前处理和液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于渔业养殖用水中恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、沙拉沙星、依诺沙星、洛美沙星、萘啶酸、恶喹酸、氟甲喹、丹诺沙星、双氟沙星、奥比沙星、司帕沙星、氟罗沙星16种抗生素残留量的测定。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其有效版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 原理 水样用混合纤维素滤膜过滤后，喹诺酮类抗生素经固相萃取柱富集、洗脱和净化后，供液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。 4 试剂和材料 4.1 甲醇（CH3OH）。 4.2 乙腈（CH3CN）。 甲酸（HCOOH）。 乙酸铵（CH3COONH4）。 氨水（NH3·H2O）：优级纯。 4.6 5 mmol/L乙酸铵缓冲液：称取0.1925 g乙酸铵（4.4），溶于500 mL水中。用甲酸（4.3）调节pH为3±0.05。 4.7 5%氨水甲醇溶液：量取5 mL氨水（4.5），用甲醇稀释并定容至100 mL。 0.1%甲酸水溶液：量取1?mL甲酸（4.3），用水稀释至1000 mL。 4.9 0.1%甲酸水-乙腈：（9+1，体积比），量取90mL0.1%甲酸水溶液（4.8）和10mL乙腈（4.2）混合。 4.10 标准物质：恩诺沙星（Enrofloxacin）、诺氟沙星（Norfloxacin）、培氟沙星（Pefloxacin）、环丙沙星（Ciprofloxacin）、氧氟沙星（Ofloxacin）、沙拉沙星（Sarafloxacin）、依诺沙星（Enoxacin）、洛美沙星（Lomefloxacin）、萘啶酸（Nalidixic acid）、恶喹酸（Oxolinic acid）、氟甲喹（Flumequine）、丹诺沙星（Danafloxacin）、双氟沙星（Difloxacin）、奥比沙星（Orbifloxacin）、司帕沙星（Sparfloxacin）、氟罗沙星（Fleroxacin），纯度≥97.0%。 4.11 内标物质：氘代诺氟沙星，氘代环丙沙星、氘代恩诺沙星，纯度≥97.0%。 4.12 喹诺酮类标准储备溶液：分别称取适量喹诺酮类标准品（4.10），用甲醇(4.1)溶解并定容至10?mL，使各种喹诺酮的浓度均为1.0 mg/mL。-18℃以下避光保存，有效期6个月。 4.13 内标标准储备溶液：分别称取适量内标标准品（4.11），用甲醇(4.1)溶解并定容至10?mL，使各种内标浓度均为1.0 mg/mL。-18℃以下避光保存，有效期6个月。 4.14 混合标准中间溶液：分别量取适量标准储备溶液(4.12)于100?mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释配制成浓度为1 μg/mL的混合标准中间溶液。-18℃以下避光保存，有效期3个月。 4.15 混合标准工作溶液：根据需要用0.1%甲酸水-乙腈（4.9）由混合标准中间液（4.14）稀释成合适的混合标准工作溶液，现配现用。 4.16 混合内标标准工作溶液：分别量取适量标准储备溶液(4.13)于100?mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释配制成浓度为1 μg/mL的混合内标标准工作溶液。-18℃以下避光保存，有效期3个月。 注：除另有说明外，以下所用的试剂均为色谱纯，试验用水为GB/T 6682 规定的一级水。 5 仪器和设备 5.1 液相色谱-串联四极杆质谱仪，配电喷雾离子源(ESI)。 5.2 天平：感量0.01 g。 5.3 分析天平：感量0.00001 g。 5.4 涡旋混合器。 5.5 氮吹仪。 5.6 pH计：测量精度±0.05。 5.7 刻度玻璃离心管：10 mL。 5.8 混合纤维素滤膜：0.45 μm。 5.9 水系滤膜：0.22 μm。 5.10 固相萃取柱：HLB固相萃取柱：500 mg，6 mL，或性能相当者。 5.11 固相萃取装置。 6 样品制备与保存 采集的渔业养殖水样经0.45 μm混合纤维素滤膜过滤。如水样较浑浊，可更换滤膜或过滤2次。过滤后的水样于4℃密封保存，24 h内进行检测。 ——取过滤后的供试样品，作为供试试料。 ——取过滤后的空白样品，作为空白试料。 ——取过滤后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。 7 测定步骤 7.1 提取和净化 依次用6 mL甲醇，6 mL超纯水，