法医DNA分型课件.pptVIP

DNA指纹的优缺点 最显著的特点是具有很高的鉴别能力，其杂交图谱显示出多条个体特异谱带，即使只使用一种探针，也可根据杂交图谱准确判定两份样本是否来源于同一个体。 对检材要求较高，不能分析降解的DNA，判读和结果解释比单位点探针困难。 4.2 DNA纹印(DNA Profile) 原理与DNA指纹类似 不同之处在于探针序列,序列中含有不重复序列,以定位某一个具体位点 DNA纹印原理 DNA指纹原理 一例案件的DNA纹印图谱 单位点探针只能与DNA分子上的单一位点杂交，纯合时出现一条杂交带，杂合时出现两条带，故个人识别能力不如多位点探针。 为了提高单位点探针的鉴别能力，可以用两种或两种以上的单位点探针对同一份检材进行检测。 DNA纹印优点： ①图谱容易判读，每个单位点探针只能检出1—2条带。 DNA纹印优点： ①图谱容易判读，每个单位点探针只能检出1—2条带。 ②用单位点探针很容易了解到DNA指纹图上的杂交带来自哪一个位点，便于统计分析。 DNA纹印优点： ①图谱容易判读，每个单位点探针只能检出1—2条带。 ②用单位点探针很容易了解到DNA指纹图上的杂交带来自哪一个位点，便于统计分析。 ③易于分析混合斑的DNA样品。多位点探针所得的杂交图谱上的条带较多，如果两个或两个以上的样品混合在一起(在凶杀、强奸、轮奸等案件中常出现这种情况)，所得的杂交图谱上的条带更复杂，难以分析结果。而用单位点探针检测时，因每一样品最多只出现两条杂交谱带，对于混合样品检测结果的分析就显得较为方便。 DNA纹印优点： ①图谱容易判读，每个单位点探针只能检出1—2条带。 ②用单位点探针很容易了解到DNA指纹图上的杂交带来自哪一个位点，便于统计分析。 ③易于分析混合斑的DNA样品。多位点探针所得的杂交图谱上的条带较多，如果两个或两个以上的样品混合在一起(在凶杀、强奸、轮奸等案件中常出现这种情况)，所得的杂交图谱上的条带更复杂，难以分析结果。而用单位点探针检测时，因每一样品最多只出现两条杂交谱带，对于混合样品检测结果的分析就显得较为方便。 ④可分析部分降解的DNA，能检测分子量较小的DNA片段(1-4kb)，而多位点探针所检测的DNA片段通常在4-24kb之间，若DNA片段小于4kb一般不能检测。 三、STR位点的分析： PCR方法 （Polymerase Chain Reaction, 聚合酶链式反应) 3.1 PCR的基本原理 在体外条件下，利用DNA聚合酶的催化作用，以靶DNA作为模板，由一对引物引导DNA合成，使两引物间的靶DNA片段得到特异性的扩增。 其扩增产物的特异性是由引物的序列所决定的。 DNA 变性 引物结合 延伸 一次扩增 结果 二次扩增 … … … ↓ ↓ ↓ ↓ ↓ 3.1 PCR的基本原理 在体外条件下，利用DNA聚合酶的催化作用，以靶DNA作为模板，由一对引物引导DNA合成，使两引物间的靶DNA片段得到特异性的扩增。 其扩增产物的特异性是由引物的序列所决定的。 所谓引物(primer)是由DNA合成仪人工合成的与待扩增的DNA片段两翼互补的寡核苷酸片段(由几个或几十个碱基组成)。 3.1 PCR的基本原理 在体外条件下，利用DNA聚合酶的催化作用，以靶DNA作为模板，由一对引物引导DNA合成，使两引物间的靶DNA片段得到特异性的扩增。 其扩增产物的特异性是由引物的序列所决定的。 所谓引物(Primer)是由DNA合成仪人工合成的与待扩增的DNA片段两翼互补的寡核苷酸片段(由几个或几十个碱基组成)。 在进行PCR时，DNA的合成只能在两引物之间沿待扩增的DNA模板进行，从而得到两条与模板DNA序列完全互补的DNA新链。 3.2 PCR的反应过程 将耐热DNA聚合酶（通常使用的是Taq DNA polymerase）、引物、脱氧核糖核苷酸（包括dATP、dCTP、dGTP和dTTP）、待扩增的模板DNA及提供最佳反应条件的缓冲系统等按照适当的比例混合组成的反应体系装于扩增管中。 通过DNA扩增仪以不同的温度循环进行扩增。 每个循环周期一般包括三个基本步骤： ①模板DNA变性：即在940—960C高温下使模板DNA发生热变性，打开DNA双链。 每个循环周期一般包括三个基本步骤： ①模板DNA变性：即在940—960C高温下使模板DNA发生热变性，打开DNA双链。 ②退火：降低温度(50-600C)使引物与模