蛋白质的提取与粗分离.pptxVIP

蛋白质提取与粗分级;第一节 蛋白质分离纯化概述;蛋白质分离主要步骤;实验材料的选择;预处理;第二节 蛋白质的提取;蛋白质提取缓冲液的成分;蛋白质提取缓冲液的成分;第三节 蛋白质粗分级;蛋白质的粗分级主要有以下七种:;1.硫酸铵分级沉淀; 在蛋白质的抽提液中加入一定量的中性盐，使蛋白质沉淀下来，常用的中性盐为(NH4)2SO4、NH4Cl等。 中性盐对球状蛋白的溶解度有显著的影响： 盐溶：低浓度的中性盐可增加蛋白质的溶解度。 盐析：高浓度的中性盐，如饱和(NH4)2SO4使 蛋白质溶解度下降，从溶液中沉淀析出。;在蛋白质的盐析中，通常采用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、氯化钠和磷酸钠等，其中以硫酸铵最为常用。因为硫酸铵在水中的溶解度大而且温度系数小(在25℃ 时，溶解度为767g／L；0℃时，溶解度为697g／L)、不影响酶的活性，分离效果好，而且价廉易得。然而用硫酸铵进行盐析时，缓冲能力较差，而且铵离子的存在会干扰蛋白质的测定，所以有时也用其他中性盐进行盐析。 ;硫酸铵沉淀蛋白质主要与盐浓度有关，硫酸铵浓度的表示方法是以饱和溶液的百分数表示，称为百分饱和度，而不用实际的克数或克分子数，这是由于当固体硫酸铵加到水溶液中去时，会出现相当大的非线性体积变化。 ;蛋白质的盐析;影响盐析的因素;2.有机溶剂分级沉淀;;3.超速离心法;蛋白质在离心场中沉降时: Fc(离心力) = mpω2x（离心加速度） Fb(浮力) = Vpρω2 χ= mpυρω2x Ff(摩擦力) = fν= f(dx/dt) 通过测定沉降界面的移动速度测定Mr. dx/dt为常数 Fc- Fb = Ff (dχ/dt) mp（1-υρ） f ω2χ ;;;5.透析法;6.超滤法;谢谢观赏！