成信工环境工程微生物学实验指导05微生物培养物的特征观察和纯培养物的分离纯化.docVIP

PAGE 22 PAGE 21 PAGE 1 实验五 微生物培养物的特征观察和纯培养物的分离纯化 一、实验目的： 1、通过观察实验四培养的菌落特征，注意掌握菌落特点的表述（形状、颜色、大小，数量等）。 2、掌握纯培养物分离纯化技术。 3、了解土壤、污水和自来水不同取样处的菌落特征。 二、实验原理 微生物的固体培养物的特征，即菌落的形态、大小、颜色等特征，菌落的特征主要由各种微生物特殊的遗传特性决定，同时也与培养基成分及培养条件有关。当固定培养基成分及培养条件相同时，不同种类微生物形成的菌落特征是固定的，可作为微生物鉴定的重要依据。而实验四的稀释涂布技术是微生物培养纯化的第一个关键技术；另外，划线分离技术是针对固体培养基中培养物的分离而言，同样，划线分离、纯化技术工作对污染控制也具有特别重要的意义。故本实验旨在让同学们掌握对微生物固体培养特征——菌落的观察描述；同时掌握划线分离纯化技术。 三、材料、仪器 1、实验四中培养的平板菌落 2、灭菌好平面皿（实验四已备好） 3、10张废报纸、纱布、棉花少许，制作瓶塞 4、 4个酒精灯；4个电炉；灭菌好的接种环10支；无菌水 5、培养箱、灭菌移液管等 四、实验内容 （一）微生物培养物的特征观察 1. 首先，拿出培养好(24-48h)的不同稀释梯度的平板，把所观察到的平板中的菌落数记录下来。 2. 观察平面皿中长出菌落的特征，如：大小、形状、光泽、颜色、质地软硬、透明度、湿润、粘稠、与基质结合是否松散，是否易被剥离，质地是否均匀，各部位颜色是否一致等。做好每个菌落的记录（1-2种单菌落）。 3. 挑取1-2种纯种菌落进行划线、分离和纯化。 （二）细菌纯种分离 1．稀释平板分离法 从前面制作的平板上挑取不同的菌落，在无菌条件下，接种于斜面培养基上。30℃培养24 h，将每支斜面试管编号并注明日期，存入冰箱，用以观察分离出来的细菌的菌落特征及个体形态。 2．平板划线分离法 （1）取样 用无菌三角瓶取一定量的有代表性的土壤、活性污泥或生物膜样品，立即送实验室检测，否则存入冰箱（不得超过12h）。 （2）样品处理 取20g（或适量）样品放入内有玻璃珠的无菌水中，振荡20min，将团粒打碎。 （3）制平板 将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基融化，然后至约45℃左右，以无菌操作将肉膏蛋白胨琼脂培养基倒入无菌培养皿内，其厚度约为0.3cm。根据经验，直径为9cm的培养皿一般倾注15～20mL培养基为宜。倾注前，应先将盛有培养基的容器瓶口或管口于火焰上转一圈。培养基注入后，立即盖好皿盖，平放于桌上，轻轻转动，待凝固后，即成平板。 （4）划线 无菌操作，先将接种环在火焰上烧灼灭菌，冷却后，用接种环（图18）挑取一环活性污泥（或土壤悬液等），左手拿培养皿，中指、无名指和小指托住皿底，拇指和食指夹住皿盖，将培养皿稍倾斜，左手拇指和食指将皿盖掀半开，右手将接种环伸入培养皿内，在平板上轻轻划线（切勿划破培养基），划线的方式可取图19中任何一种。划线完毕后，盖好皿盖，倒置，30℃培养24～48 h后观察结果。 图19 平板划线分离方法 五、实验报告 1、 首先取上次实验涂平板的菌落来观察，并记录、描述你所观察到菌落的特征，编号依次说明？ 2、绘图描述分离的1-2个菌落的特征，必要时加以文字说明？ 3、挑取1-2个单个菌落，进行划线分离。 思考题 菌落特征在微生物物种鉴定中的作用？ 划线分离时的注意事项是什么？ 范例：实验报告的主要内容（以学校制订统一报告为准） 实验Х ХХХХХХ 一、实验目的 1. 2. 3. …………………………. 二、实验仪器、材料 1. 2. 3. …………………………. 三、实验原理 1. 2. 3. …………………………. 四、实验主要内容（包括操作步骤和观察结果，能用图表示的，并附图） 1. 2. 3. …………………………. 五、思考题和注意事项 1. 2. 3. ………………………….