溶液各种配制.docxVIP

附录：常用试剂配制及应用 一、常用缓冲液、试剂的配制 碳酸盐缓冲液(Carbonate-Bicarbonate Buffer) 由于碳酸盐 pH 值偏碱，因此，常用于 pH9 的缓冲液配制（附表 1）。 附表 1. 0.2 mol/L 碳酸盐缓冲液（～） pH pH L Na CO 2 3 L NaHCO pH L Na CO 2 3 L NaHCO 3 3 (ml) (ml) (ml) (ml) 磷酸缓冲液(Phosphate Buffers，PB) 磷酸盐是使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa 值， 所以用它们配制的缓冲液，pH 范围最宽。NaH PO4：pKa1＝，pKa2＝； Na HPO4： 2 2 pKa1＝，pKa2＝。 另外，磷酸盐还有钾盐分子形式，一般来说，低温时钠盐难溶，钾盐易溶， 因此，配制细胞培养用试剂时常常添加钾盐试剂，但若配制十二烷基硫酸钠（SDS） -聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用钠盐而不能用钾盐，因为 SDS 会与磷酸钾生成难溶的十二烷基硫酸钾。 磷酸缓冲液的优点为：①可配制成不同离子强度的缓冲液；②适用 pH 缓冲范围较宽；③受温度影响缓冲液 pH 值变化较小；④离子强度对缓冲液 pH 影响较 小，如 L 缓冲液稀释 10 倍其 pH 变化小于。 磷酸缓冲液的缺点是：①磷酸盐易与钙离子（Ca2+）、镁离子（Mg2+）及重金属离子结合生成不溶的沉淀物；②可能干扰某些生物化学反应过程，如对某些酶的催化活性具有一定程度的抑制作用。 NaH PO 的 pH 值偏酸性，可用作 pH4 的缓冲液。 2 4 Na HPO 的 pH 值偏碱性，可用作 pH10 的缓冲液。 2 4 而 pH＝6～8 的中性缓冲液是更常用的缓冲液，需要 NaH PO 与 Na HPO 两种磷 酸盐混合配制（附表 2）。 2 4 2 4 附表 2. 0.2 mol/L 磷酸盐缓冲液（～） pH pH L NaH PO 2 4 L Na H PO 2 4 pH L NaH PO 2 4 L Na H PO 2 4 (ml) (ml) (ml) (ml) 磷酸盐缓冲溶液（Phosphate-buffered saline, PBS) 磷酸盐缓冲液是在磷酸缓冲液基础上添加 NaCl 以维持溶液的渗透压，因此， PBS 适用于做细胞缓冲液，常用 PBS 配制如下。NaCl 8g KCl 0.2g Na HPO 1.44g 2 4 KH PO  0.24g 2 4 在 800ml 蒸馏水中溶解，用 HCl 调节溶液的 pH 值至～加水定容至 1L，15psi （1.05kg/cm2）高压灭菌 20min，室温保存备用。Tris 缓冲液（Tris-HCl Buffer, TB） Tris 的 pH 值偏于碱性，因此，通过添加 HCl 调节 pH 至所需值，Tris-HCl 缓冲液的离子强度（mol/L）是专指Tris 的浓度，如某一特定pH 的 mol/L Tris 缓冲液的配制是将 50ml mol/L Tris 碱溶液与附表 3 所示相应体积（ml）的mol/L HCl 混合，加水至将体积 100ml，即为 mol/L Tris 缓冲液。 另外，按附表 3 制备的缓冲液，由于试剂来源的不同，缓冲液 pH 可能与所需略有差异，此时可通过稍许减少或增加 HCl 用量，精细调节 pH 至所需值。 附表 4. 0.05 mol/L Tris 缓冲液 pH pH 需 mol/L HCl（ml) pH 需 mol/L HCl（ml) Tris 盐缓冲液（TBS）： Tris 盐缓冲液是在 Tris 缓冲液基础上添加 NaCl 以维持溶液的渗透压，因此，TBS 也适用于做细胞缓冲液，常用 TBS 配制如下。 8g NaCl、0.2g KCl 以及 3g Tris 溶解于 800ml 蒸馏水中，加入 0.015g 酚红并用 HCl 调 pH 至用蒸馏水定容至 1L，分装后在 15psi（1.05kg/cm2）高压灭菌 20min，室温保存。 现在常用 Tris 盐缓冲液通常不加 pH 指示剂，而且该溶液如果不用于细胞培养，通常不加 KCl 及酚红。 Hank’s 液 (Hank’s Balanced Salt Solution) 贮存液 A 液：(I)NaCl 贮存液 A 液： (I)NaCl 80g KCl 4g MgSO ·7H O 1g 4 2 MgCl MgCl ·6H O 1g 2 2 用双蒸馏水定容至 450ml。 (II)CaCl 2 1.4g (或 CaCl ·2H O 1.85g) 2 2 用双蒸馏水定容至 50ml。 将 I 和 II 液混合，即成 A 液。 贮存液 B 液： Na HPO ·12H