常见微生物培养检测技术.pptVIP

5、装配 多数DNA病毒在细胞核内合成装配,RNA病毒在细胞浆内合成装配。 第三十页，共三十八页，2022年，8月28日 6、释放 有的病毒聚积在细胞空泡内后通过细胞通道向外溢出;有的依靠细胞膨胀破裂放出;有的则因细胞感染病毒后死亡裂解或自溶而释出。有囊膜的病毒多数借出芽而穿出细胞游离。 第三十一页，共三十八页，2022年，8月28日 一、动物接种 动物选择标准:对病毒的易感性高;动物健康,体重、年龄尽可能一致,最好使用相应的等级实验动物,并符合所要培养病毒的要求;尽量使用遗传特性相似,个体差异较小,生物学反应比较一致的动物;外购动物,接种前要经过健康观察,以免误用带有病原体动物。 可根据病毒性质、材料性质和目的不同,采取皮下接种法、皮内接种、肌肉接种、静脉接种、腹腔接种法、脑内接种法。 第三十二页，共三十八页，2022年，8月28日 二、禽胚培养 理想的禽胚为SPF鸡胚。常用非免疫鸡胚加以补充,这种蛋应无特定病原的母源抗体,否则会影响病毒在胚内增殖。此外,不同病原对禽胚的适应性也不同,如狂犬病和减蛋综合征病毒在鸭胚中比鸡胚中更易增殖,鸡传染性喉气管炎病毒只能在鸡和火鸡胚内增殖,实际应用时而加以严格选择。 常用的接种途径有绒毛尿囊膜法、尿囊腔法、羊膜腔法和卵黄囊法四种,根据不同的病毒和不同的目的采用适宜的接种途径。 第三十三页，共三十八页，2022年，8月28日 绒毛尿囊膜接种(10-13日龄胚) 尿囊腔接种(9-11日龄胚) 羊膜腔接种(10-12日龄胚) 卵黄囊接种(5-8日龄胚) 禽胚接种术式 第三十四页，共三十八页，2022年，8月28日 鸡胚不同接种途径与收获比较 接种途径 日龄 方　　法 破壳部位 接种量(ml) 收　　获 尿囊膜 10-13 开蛋窗及人工气室或钻孔 绒毛尿囊膜发育中心及气室 0.05-0.1 扩大蛋窗、收集接种部绒毛尿囊膜 尿囊腔 9-11 钻孔 胚胎面与气室交界边缘上、下约1mm处 0.1-0.2 破气室,收集尿囊液(5-8ml) 羊膜腔 10-12 开蛋窗 气室端靠近胚胎侧 0.1-0.2 扩大蛋窗,收集尿囊液及羊水 卵黄囊 5-8 钻孔 气室中心 0.2-0.5 破气室,收集去卵黄的卵黄囊或鸡胚体 第三十五页，共三十八页，2022年，8月28日 影响禽胚病毒增殖的因素 1.种蛋质量: SPF种蛋最理想,其次是非免蛋,普通种蛋不能用。 病原微生物:家禽有很多疫病可经垂直传递于鸡胚,这些病原体既可污染制品本身,又可影响接种病毒在鸡胚内增殖 母源抗体:种蛋带有母源抗体,影响病毒在鸡胚内增殖 抗生素:家禽混合饲料中常含有一定的抗生素,这种微量的抗生素可以传递给蛋胚残留 第三十六页，共三十八页，2022年，8月28日 2.孵化技术:适宜的孵化条件有利于病毒增殖 温度:通常适宜温度为37-39.5℃。宁低勿高。 湿度:鸡胚孵化标准为53%-57%,水禽胚孵化比鸡胚高5%-10%。 通风:发育过程中吸入氧气排出二氧化碳,随胚龄增长需更换孵化机内空气。 转蛋:大头向上垂直放置入孵,在孵化过程中定期转蛋,使胚胎受热均匀,防止胚胎与蛋壳粘连 3.接种技术:不同病毒的增殖有不同的接种途径,同一种病毒接种不同日龄禽胚获得的病毒量也不同。同时,接种操作应严格按照规定,不应伤及胚体和血管,以免影响其发育,使病毒增殖速度降低或停止。 第三十七页，共三十八页，2022年，8月28日 细胞培养从广义上讲是体外培养之一。体外培养包括器官培养、组织培养和细胞培养。 器官培养常指对未分散组织进行培养,可保留部分或全部组织在机体中的组织形态。 组织培养是指从体内取出组织,模拟体内生理环境,在无菌、适当温度和一定营养条件下,使之生存和生长,并维持其结构和功能的方法。 细胞培养是指利用机械、酶或化学方法使动物组织或传代细胞分散成单个乃至2－4个细胞团悬液进行培养。 根据培养细胞的染色体和繁殖特性,细胞可分为三类,即原代细胞、细胞株和细胞系。 三、组织培养 第三十八页，共三十八页，2022年，8月28日 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 第一页，共三十八页，2022年，8月28日 细菌培养方式 用人工方法,将细菌从自然界、动物体或病料中分离出来,研究细菌的形态、生理特性、生物学特性或制取细菌的某种代谢产物等,这对于传染病的诊断和防治具有重要意义。 根据不同标本及不同培养目的,可选用不同的接种和培养方法。常用的有分离培养和纯培养两种方法。 第二页，共三十八页，2022年，8月28日 (一)培养基的种类和常用培养基 培养基的概念： 将细菌所需的各种营养物质按一定比例混合在一起,并调节到适宜的PH,这种人工配制的适合细菌生长繁殖的细菌营养物,称为培养基。 培养基配制原则：