自然科学蛋白质的测定.pptxVIP

自然科学蛋白质的测定;一、概述 1、食品中的蛋白质含量 ;;2、蛋白质的生理功用及在食品中的作用;3、蛋白质系数 ;样品;二、测定方法 ;（一）凯氏定氮法（GB/T 5009.5-2003);The Kjeldahl Procedure凯氏法的程序 ;1、原理 2NH2(CH2)2COOH+13H2SO4→(NH4)2SO4+6CO2+12SO2+16H2O 消化 ;2、仪器 凯氏烧瓶、可调式电炉、蒸汽蒸馏装置 ;3、试剂 （1）硫酸铜（CuSO4·5H2O）； （2）硫酸钾； （3）浓硫酸:密度为1.8419 g/L （4）氢氧化钠溶液:400g/L （5)硼酸溶液:20g/L;（6） 0.05 mol／L盐酸标准滴定溶液 （7）95%乙醇。 （8）混合指示液:1份甲基红乙醇溶液(1 g/L)与5份溴甲酚绿乙醇溶液(1 g/L)临用时混合。也可用2份甲基红乙醇溶液(1 g/L)与1份亚甲基蓝乙醇溶液(1 g/L)临用时混合。;4、操作方法 样品消化→蒸馏→滴定 （1）样品消化 ;（2）蒸馏;（2）蒸馏 ;;（3）滴定 取下接收瓶，用0.1000mol/L的盐酸或硫酸标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点。;5、计算 ;6、说明及注意事项 （1）?试剂溶液应用无氨蒸馏水配制 （2）消化时不要用强火，应保持缓和沸腾，消化中不时转动凯氏烧瓶，以便冷凝酸液洗下附在瓶壁上的固体残渣，促进其消化完全。;;硫酸钾的作用;硫酸铜的作用;（4）样品中若含较多脂肪或糖，在开始消化时应用小火加热，并时时摇动；或者加入少量辛醇或液体石蜡或硅油消泡剂，并同时注意控制热源强度。 （5）当样品消化液不易澄清透明时，可将凯氏烧瓶冷却，加入30%过氧化氢2～3ml后再继续加热消化。 ;;（9）蒸馏前若加碱量不足，消化液呈蓝色不生成氢氧化铜沉淀，需再增加氢氧化钠用量 （10）硼酸吸收液的温度不应超过40℃，否则对氨的吸收作用减弱，置于冷水浴中使用。 （11）蒸馏完毕后，应先将冷凝管下端提离液面,清洗管口，再蒸1分钟后关掉热源，否则可能造成吸收液倒吸。 ;7、自动凯氏定氮仪法 在凯氏定氮法的基础上发展起来的自动凯氏定氮仪法，具有安全、高效、准确的优点。 仪器： ;FOSS 产品线——化学分析仪器;FOSS 产品线——化学分析仪器;Digestion Blocks消化炉;Lift, Exhaust Manifold and Scrubber消化炉、升降装置、排废罩和??气装置;New generation of Kjeltec Systems新一代凯氏定氮仪-前所未有的智能化系统！;KjeltecTM 8100 凯氏定氮仪;KjeltecTM 8200 凯氏定氮仪;KjeltecTM 8400 全自动凯氏定氮仪;KjeltecTM 8420 自动进样器;KjeltecTM 8460 自动进样器;KjeltecTM 自动进样器;仪器性能;（二）蛋白质快速测定法 ;1.双缩脲法;双缩脲与碱及少量硫酸铜溶液作用生成紫红色的配合物，此反应称为双缩脲反应： ;（2）方法特点及应用范围;（3）操作方法①标准曲线的制作;②样品的测定;（4）结果计算;（5）说明及注意事项;⑤当肽链中含有脯氨酸时，若有多量糖类共存，则显色不好，会使测定值偏低。 ⑥碱性硫酸铜溶液由0.1mol 氢氧化钾、5g 酒石酸钾钠、1.6g 硫酸铜溶于水后加水至1000mL 配成。 ;2.福林-酚比色法;;3.考马斯亮蓝染料比色法;测定 吸取样品稀释液2mL，加染料试剂2mL，混匀，以介质溶液调零，测定A620nm，与蛋白质标准溶液对照，求出样品蛋白质含量。 本法在0～100mg/L 蛋白质范围内呈良好的线性关系。 ;氨基酸态氮的测定;1.双指示剂甲醛滴定法 原理 氨基酸具有酸性的-COOH基和碱性的-NH2基。它们相互作用而使氨基酸成为中性的内盐。当加入甲醛溶液时，-NH2基与甲醛结合，从而使其碱性消失。这样就可以用强碱标准溶液来滴定-COOH基，并用间接的方法测定氨基酸的总量。 ;; (2) 操作方法 移取含氨基酸约20～30mg的样品溶液2份，分别置于250ml锥形瓶中，各加50ml 蒸馏水，其中1份加入3滴中性红指示剂，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至由红变为 琥珀 色为终点；另1份加入3滴百里酚酞指示剂及中性甲醛20ml，摇匀，静置1分钟，用0.1ml/L氢氧化钠标准溶液滴定至淡蓝色为终点。分别纪录两次所消耗的碱液ml数。 ;式中 c ——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L; V1——用中性红作指示剂滴定时消耗氢氧化钠标准溶液的