酶免疫检验的学习材料.pptxVIP

酶免疫检验的学习材料第1页/共62页 二、常用的免疫标记物质类别 标记物 用途荧光素 FITC、RB200、TRITC 免疫组化 镧系元素螯合物 免疫分析测定放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析测定 125I、131I酶 HRP、AP 免疫组化 免疫分析测定化学发光物 Luminol、lucigenin 免疫分析测定金属颗粒 胶体金、铁蛋白 免疫组化 免疫分析测定 第2页/共62页 酶标仪第3页/共62页 荧光显微镜第4页/共62页 FCM检测分析细胞表面受体的表达第5页/共62页 β液闪仪γ计数器第6页/共62页 金 免 疫 技 术第7页/共62页 吸水纸吸水纸金标抗体包被抗体抗金标抗体第8页/共62页 化学发光免疫分析技术 化学发光酶免疫测定：测定过程与传统ELISA相似，仅最后一步酶反应所 用底物为发光剂（鲁米诺-过氧化氢发光体系）第9页/共62页 标记免疫技术的分类一、按指示标记物质划分的类型二、按测定方式划分的类型三、按测定用途划分的类型第10页/共62页 1、酶免疫技术2、荧光免疫技术3、放射免疫技术4、化学发光免疫分析技术5、金免疫技术按指示标记物质划分的类型第11页/共62页 1、均相型（homogenous）2、非均相型（异相型 heterogeneous）按测定方式划分的类型第12页/共62页 均相型（homogenous）反应完成后，不用分离结合与游离的标记物非均相型（异相型heterogeneous）反应完成后，要分离结合与游离的标记物。又可分为液相异相免疫测定和固相异相免疫测定第13页/共62页 1、免疫测定技术2、免疫组化技术按测定用途划分的类型第14页/共62页 第八章 酶免疫技术第15页/共62页 本章要求熟悉酶免疫技术的分类及原理；掌握ELISA的方法类型及各方法的原理；测定方法的标准化；熟悉酶免疫组织化学技术的原理；了解各类酶免疫组织化学技术；熟悉免疫印迹法的原理。第16页/共62页 酶免疫技术的基本原理　　酶免疫技术是以酶标记抗原或酶标记抗体为主要试剂，通过复合物中的酶催化底物呈色而对被测物进行定性或定量的标记免疫技术。 第17页/共62页 　　在免疫组化染色时可指示待测反应物的存在和定位，在酶免疫测定中，则可根据呈色物的有无和呈色深浅作定性或定量观察。由于此技术是建立在抗原抗体反应和酶的高效催化作用的基础上，故而该技术具有检测灵敏度高、特异性强、准确性好等特点，而且，可与其他技术偶联而衍生出适用范围更广的新方法。 第18页/共62页 酶免疫技术的分类 按检测对象的不同一般分为两类 1.酶免疫组织化学技术 用于检测组织切片或细胞涂片中的抗原或抗体。可指示待测反应物的存在和定位。2.酶免疫测定技术 用于检测液体样本中可溶性抗原或抗体。 根据呈色物的有无和呈色深浅作定性或定量观察。第19页/共62页 第20页/共62页 酶免疫技术的分类 根据抗原抗体反应后是否需要分离结合的和游离的酶标记物，可分为： 1. 均相法：不需要分离结合和游离的酶标记物，直接进行测定。 2. 异相法：需要分离结合和游离的酶标记物后才能进行测定。 　　　固相酶免疫：ELISA 　　　液相酶免疫第21页/共62页 酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)基本原理 　　① 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。????② 使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，且既保留其免疫活性又保留酶的活性