食品微生物鉴定技术和方法.pptxVIP

食品微生物鉴定技术和方法;微生物的分离、纯化与接种技术;微生物的分离、纯化与接种技术;划线接种，分离纯化;;第6页/共59页;微生物纯培养的获得的方法 无氮培养基——筛出固氮菌； 无有机碳源的培养基——筛出硝化细菌； 无有机碳源的培养基且无氧有光环境——筛出光合细菌； 高浓度NaCl的培养基——筛出耐盐菌株 伊红—美蓝的培养基——筛出大肠杆菌； 青霉素的培养基——筛出酵母菌、霉菌； ……;微生物纯培养的获得的方法 传统发酵食品的starter的确定or 优势菌株的确定 例如：金华火腿的主要发酵菌； 优势细菌：乳酸菌、葡萄球菌 优势酵母菌：欧诺比假丝酵母、红酵母 微生物生态学方面的菌株确定？？ 非原位检测鉴定、原位检测鉴定;检测食品中微生物总数的方法;常规的标准平板计数（SPC） 将一部分食品样品混合或者均质化，在适当的稀释液中进行梯度稀释，然后涂布或者倾注到适宜的琼脂培养基上，在适当的温度下培养一段时间后，使用电子计数器对可见的菌落进行计数。 SPC法是目前测定活细胞数和食品产品中菌落形成单位数最广泛的方法。;常规的标准平板计数（SPC） 记录产品中全部活细胞时，要考虑以下因素： 1）采用的取样方法 2）食品样品中有机体的分类 3）食品生物区系的种类 4）食品原料的种类 5）食品产品的预检历史记录 6）所用培养基的营养程度 7）所用的培养温度和时间 8）pH值、aw和培养基的氧化还原电位 9）所用的稀释液类型 10）食品样品中有机体的相对数量 11）竞争或拮抗有机体的存在 ;显微镜菌落计数法 是通过显微镜对载玻片琼脂层上生长的微小菌落计数。首先进行涂布，将0.1ml的牛乳琼脂混合物涂布到4cm2的载玻片上，经培养，干燥和染色，借助显微镜对微小菌落进行计数。 另一种方法是将2ml融化的琼脂与2ml热牛乳混合，随后取0.1ml已经接种的琼脂涂抹到4 4cm2的载玻片上，最后用硫堇蓝染色，用16mm物镜的宽视野显微镜观察载玻片。 ;最大可能数法 在这种方法中，食品样品的稀释液的准备类似于SPC法。将三个连续等分量样品或稀释梯度的稀释液转移到9个或15个有适宜培养基的??管中，分别称为3试管或5试管法。 最初样品中微生物的数量通过查阅标准MPN表来获得。通常MPN法的结果高于SPC的结果。;MPN法的优点： （1）这种方法相对比较简单 （2）与SPC法相比，不同实验室得到的结果更加可靠，相似率较高。 （3）特殊微生物群体可以通过适当的选择性培养基进行测定。 （4）这是一种测定粪大肠杆菌群含量的方法。 缺点：精确度低。 ;染色还原试验 在估测相关产品中活菌数量时，通常使用两种染色剂：亚甲基蓝和刃天青。 进行染色还原实验时，食品上清液加入任何一种染色剂标准溶液，亚甲蓝会从蓝色还原为白色，而刃天青则从暗蓝色还原为粉红色或白色，染色剂还原的时间与样品中微生物的数量成正比。;染色还原试验;食品表面微生物的检测;2.接触平板法 平板直接接触复制微生物法（RODAC）使用一种特殊的皮氏培养皿，平板中倾倒15.5－16.5ml培养基，形成琼脂平面；当把平皿倒置时，凝固的琼脂就会与待测表面直接接触，接触后盖上平皿盖、培养，然后进行菌落计数。 缺点：仅适用于菌落较分散的表面，对于污染较严重的表面无效。 ;3.琼脂注射/琼脂肠法 琼脂注射法：将1个100ml的注射器去掉针头，改造成中空的柱体，并在中空的部分注入琼脂，通过推动活塞将琼脂从柱体底部挤压到待测表面上，将露在外面的那层切下，置于皮氏平皿中，经过培养后进行菌落计数。 琼脂肠法：与注射法类似，只不过用的是塑料试管而不是改造的注射器。 广泛用于肉制品或食品加工设备表面微生物的检测。 缺点同RODAC法，适合菌落分散和表面污染程度较轻的样品。;其他检测方法： 1）直接表面检测法 2）粘性薄膜法 3）棉拭/琼脂斜面 4）超声波装置 5）喷雾枪法;第二章 食品微生物鉴定技术和方法;第二章 食品微生物鉴定技术和方法;第二章 食品微生物鉴定技术和方法;第一节 食品微生物纯培养的获得和传统的鉴定方法;第二章 食品微生物鉴定技术和方法;第二章 食品微生物鉴定技术和方法;第二章 食品微生物鉴定技术和方法;第二章 食品微生物鉴定技术和方法; 每个生物种都有特定的GC%范围，因此 可以作为分类鉴定的指标。细菌的GC%范围为25--75%，变化范围最大，因此更适合于细菌的分类鉴定。; GC%测定主要用于对表型特征难区分的细菌 作出鉴定，并可检验表型特征分类的合理性， 从分子水平上判断物种的亲缘关系。;