氨基酸、肽类、蛋白质和酶类药物的分析.pptxVIP

贾广韬;掌握氨基酸定性鉴别的方法，熟悉氨基酸特殊杂质及安全性检查，掌握氨基酸含量测定方法。 掌握多肽因子类药物的定性鉴别方法，熟悉多肽因子类药物的检查方法，掌握多肽因子类药物生物效价的测定方法。 掌握蛋白质类药物的鉴别和检查方法，掌握蛋白质含量测定和效价测定方法。 了解几种氨基酸、多肽因子和蛋白质药物的质量分析过程。;主要内容;从各种生物体中发现的氨基酸已有180多种，但是参与蛋白质组成的常见氨基酸或称基本氨基酸只有二十种。 180多种天然氨基酸大多数是不参与蛋白质组成的，这些氨基酸被称为非蛋白质氨基酸。 氨基酸是构成机体蛋白质的基本单位，且构成生物体蛋白质的氨基酸都是α-氨基酸，除甘氨酸外，α-碳原子均为不对称碳原子，具有立体异构现象，均是L-型氨基酸。;180；20;氨基酸为构成天然蛋白质的基本单位，故蛋白质营养价值实际是氨甚酸作用的反映。健康人靠膳食中的蛋白质获取各种氨基酸满足机体需求。缺乏蛋白质则影响机体生长及正常生理功能，抗病力减弱引起病变。 消化道功能严重障碍者及手术后病人常因禁食无法获得足够蛋白质，自身蛋白质过量消耗，致使营养不良而导致病情恶化或预后不良。 临床上常通过直接输入氨基酸制剂改善患者营养状况，增加治疗机会，促进康复。;蛋白质营养价值氨基酸;烧伤、创伤、大手术后需要补充谷氨酰胺;治疗消化道疾病的氨基酸及其衍生物 治疗肝病的氨基酸及其衍生物 治疗脑及神经系统疾病的氨基酸及其衍生物 用于肿瘤治疗的氨基酸及其衍生物 其它氨基酸类药物的临床应用 ;氨基酸类药物的生产方法 1、 目前全世界天然氨基酸的年总产量在百万吨左右，其中产量较大者有谷氨酸、蛋氨酸及赖氨酸，其次为天门冬氨酸、苯丙氨酸及胱氨酸等。它们主要用于医药、食品、饲料及化工行业中。 2、 目前构成天然蛋白质的20种氨基酸的生产方法有天然蛋白质水解法、发酵法、酶转化法及化学合成法等四种。 3、 氨基酸及其衍生物类药物已有百种之多，但主要是以20种氨基酸为原料经酯化、酰化、取代及成盐等化学方法或酶转化法生产。;（一）氨基??的通式： ?-氨基酸;（一）氨基酸的通式： ?-氨基酸;3 氨基酸的性质 天然氨基酸纯品均为白色结晶性粉末； 熔点及分解点均在200-300℃； 在有机溶剂中溶解度一般较小；可溶解于水，但溶解度差别较大； 均为两性电解质，各有一定等电点。除甘氨酸外都有旋光性。 氨基酸能使水的介电常数增高，而一般的有机化合物乙醇、丙酮等却使水的介电常数降低。;构成蛋白质的20种氨基酸在可见光区都没有光吸收，在红外区和远紫外区（λ＜200nm）都有光吸收。 但芳香族氨基酸因为其R基含有苯环共轭π键系统，在近紫外区(200-400nm) 酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有吸收光的能力。 蛋白质一般在280nm有最大光吸收，可用来测定蛋白质浓度。 ;;化学通性： 氨基酸的氨基具有伯胺氨基的一切性质（如与亚硝酸反应、酰化、烃基化、形成席夫碱、脱氨） 羧基具有羧酸羧基的性质（如成盐成碱、成酰氯、脱羧、叠氮化） 氨基酸还有一部分是两者共同参加的反应（茚三酮反应、 成肽反应）;特殊基团反应： 酪氨酸的酚羟基可产生米伦反应与福林-达尼斯反应； 精氨酸的胍基产生坂口反应； 色氨酸的吲哚基与芳醛产生红色反应； 组氨酸的咪唑基产生Pauly反应； 苯丙氨酸硝化后于碱性条件下产生桔黄色反应；;（1）氨基酸的酸碱两性和等电点;（2） α-氨基参加的反应;②与酰化试剂反应;③烃基化反应（亲核取代反应）;④形成席夫碱反应;与异硫氰酸苯酯的反应;氨基酸与异硫氰酸苯酯的反应的应用 －－多肽链N-末端氨基酸残基的鉴定（Edman法） ;（3）α-羧基参加的反应;②成酰氯反应;在酸性条件下，氨基酸与茚三酮共热，生成紫色化合物;α-氨基酸与水合茚三酮试剂共热，可发生反应生成紫化合物。反应生成的化合物的颜色深浅程度以及CO2生成量，均可作为氨基酸定量分析依据。 用途：常用于氨基酸的定性或定量检测。 α-氨基和α-羧基共同参加的反应 ;②成肽反应;; ; ;旋光度、熔点、溶解度、纸层析、氨基酸自动化分析、气相色谱等均可作为氨基酸鉴别的依据;茚三酮：溶液均显蓝紫色。 旋光性：Gly；测定比旋度 紫外光谱鉴别：酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸，在紫外区有最大吸收。;红外吸收光谱图鉴别 氨基酸在红外区都有特性图谱，可以通过与标准氨基酸图谱比较作为氨基酸的鉴别依据。 所得的吸收图谱各主要吸收峰波长和各吸收峰间的相互强度关系均应与对照的图谱一致。;薄层色谱鉴别法 在薄层板上点样，通过与标准氨基酸对照而鉴别氨基酸。 （1）薄层板的制备;（2）十一种氨基酸混合液（色、蛋、亮、异亮、甘、赖、苏、缬、苯丙、组、精）与对照液的制备。 ;（3）点样、展开和显色 吸取混合液和对照液各3μL