氨基酸、肽类、蛋白质和酶类药物的分析2.pptxVIP

第八章 氨基酸、肽类、蛋白质和酶类药物的分析贾广韬上次课内容氨基酸的基本性质（两性电解质）茚三酮反应（反应原理、检测波长）紫外吸收（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸）酸碱滴定（直接滴定、甲醛滴定）非水溶液滴定（酸碱质子学说，冰醋酸/高氯酸）第二节 肽类药物的分析一、概述肽(peptide)是α－氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，它也是蛋白质水解的中间产物。一般肽中含有的氨基酸的数目为二到九。多肽的种类：免疫活性肽、抗菌肽、神经活性肽等。活性肽主要控制人体的生长、发育、免疫调节和新陈代谢。医院里治疗疾病最贵的药物几乎都是肽类的，几乎所有的慢性疾病都必须通过肽类药物治疗！肽具有原蛋白质和单体氨基酸不具备的独特的生理活性和医疗保健作用，具备营养、保健、治疗三重功能。临床肽类药物举例胰岛素【51肽】于1921年由加拿大人F.G.班廷和C.H.贝斯特首先发现。1922年开始用于临床，使过去不治的糖尿病患者得到挽救。中国科学院肾病检测研究所主治直至80年代初，用于临床的胰岛素几乎都是从猪、牛胰脏中提取的。不同动物的胰岛素组成均有所差异，猪的与人的胰岛素结构最为相似，只有B链羧基端的一个氨基酸不同。80年代初已成功地运用遗传工程技术由微生物大量生产人的胰岛素，并已用于临床。临床肽类药物举例用于治疗女性子宫内膜异位症和男性前列腺癌症的活性多肽药物醋酸亮丙瑞林【10肽】，全球销售额超过23亿美元（1600元/针）依替巴肽注射液【7肽1毫克8000元】用于抢救心梗患者临床肽类药物举例醋酸格拉替雷治疗硬化症，2011销售额超40亿美元醋酸戈舍瑞林治疗乳腺癌、前列腺癌5-15亿美元临床肽类药物举例2013年临床实验结果：在癌症已经转移并且所有已有治疗方案都无效的黑色素癌症晚期患者身上，这两种药物让60%的患者肿瘤减小乃至消失了超过2年！要知道，这些患者平时的生存时间只能以周计算，而这两种免疫药物让60%以上的患者活了超过2年！因此PD-1从临床试验阶段就一直自带光环，在审批阶段也是获得了FDA的加速批准待遇。抗癌新宠PD-1抑制剂【昂贵的蛋白肽分子、每针30000元】临床肽类药物举例目前很多医生都无权开具的红色处方药，世界上最好的顶级抗菌消炎药万古霉素【复合多肽】万古霉素适用于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及其它细菌所致的感染：败血症、感染性心内膜炎、骨髓炎、关节炎、灼伤、手术创伤等浅表性继发感染、肺炎、肺脓肿、脓胸、腹膜炎、脑膜炎等。临床肽类药物多肽药物的成药性高于一般化学药物，其生物活性高，特异性强，毒性反应相对较弱，在体内不易产生蓄积，与其他药物的相互作用比较少，与体内受体的亲和性比较好。多肽分子的稳定性较差，在体内容易被降解，因而半衰期较短，需要连续给药以维持其药效，给患者带来不便。化学合成、提取二、鉴别试验（1）紫外分光光度法五肽胃泌素，刺激胃酸、胃蛋白酶等的分泌胃酸分泌功能检查280nm检测二、鉴别试验（2）薄层色谱法Rf值，斑点颜色杆菌肽临床上抗菌谱与青霉素相似，对革兰阳性细菌和阴性球菌、肺炎双球菌、葡萄球菌、淋球菌、脑膜炎双球菌及螺旋体等均有杀菌作用。二、鉴别试验（3）HPLC（保留时间）（4）生物学法（在体分析法、离体分析法）（5）显色反应抑肽酶+甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐不显紫红色（6）其他（质谱、核磁共振、免疫学）三、检查（1）酸度（2）纯度检查（3）等电点测定（4）吸光度或吸光度比值（分光光度计）（5）热源或细菌内毒素（家兔法，鲎试剂法）（6）氨基酸比值（确定多肽质量，氨基酸在肽链中的个数）不同肽类有不同检查要求，具体以中国药典为准。四、含量检测（1）酸碱滴定法（苯酪肽，P150）取本品0.5g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液呈中性）60mL，振摇，加酚酞指示液，用氢氧化钠标准液（0.1mol/L）滴定四、含量检测（2）紫外分光光度法 五肽胃泌素取本品适量，精密称定，加0.01mol/L氨溶液溶解并定量稀释，在280nm波长处测定吸光度，按吸收系数 为70计算比吸光系数法 根据朗伯-比耳定律，若吸光系数已知，即可根据测得的A求出被测物的浓度。通常 可以从手册或文献中查到，这种方法也称绝对法。 例如：五肽胃泌素用氨溶液溶解，定量稀释在280 nm处的 值为70，于1 cm吸收池中测得溶液的吸光度为0.700，则溶液浓度为：c = 0.700 / (70×1) = 0.010 (g / 100 ml)（2）紫外吸收法 标准曲线法 取系列浓度标准溶液，测定吸光度A，作吸光度A对溶液浓度c的图，得过坐标原点的直线。在相同条件下，测量被测溶液的吸光度，在标准曲线上查得溶液度。维生素B12的标准曲线 对照品比较法 预先配制一个与待测液浓度相接近的标准溶液(其浓度用cs表示)，测得其吸光度为As，再测定待