EDCs暴露对稀有鮈鲫脑中生殖调控相关基因表达及转录.docx

EDCs暴露对稀有鮈鲫脑中生殖调控相关基因表达及转录 概述 内分泌干扰物（EDCs）是一类能够干扰生物体内内分泌系统的物质，包括天然产生的激素和外源性化合物。EDCs的暴露已被证明与多种疾病和生殖问题有关。在本次研究中，我们探究了稀有鮈鲫暴露于两种EDCs（丙烯酸（PAA）和三氯甲烷（TCM））后，其脑中生殖调控相关基因表达及转录的变化。 材料和方法 实验分为四组：对照组、PAA暴露组、TCM暴露组、PAA和TCM混合暴露组。每组实验重复三次。 鱼苗处理：50条稀有鮈鲫分为四组，分别放置于500毫升的鱼缸中。对照组鱼缸中加入培养基；PAA暴露组鱼缸中加入100 ng/mL的PAA；TCM暴露组鱼缸中加入10 μg/L的TCM；PAA和TCM混合暴露组鱼缸中加入100 ng/mL的PAA和10 μg/L的TCM。各组处理持续72小时。 采样：在处理完成后，鱼苗被捕捞并处死。脑组织被取出并用于RNA提取和内分泌干扰物浓度测定。 内分泌干扰物浓度测定：采用高效液相色谱法（HPLC）测定处理后的水中PAA和TCM浓度。 RNA提取：使用Trizol试剂（Invitrogen）从脑组织中提取RNA。RNA浓度和纯度通过NanoDrop（Thermo Scientific）检测。 cDNA合成：使用PrimeScript RT Master Mix（TaKaRa）将RNA转录成cDNA。cDNA合成后通过PCR扩增进行质控。 实时荧光定量PCR（qPCR）：使用SYBR Premix EX Taq II（TaKaRa）进行qPCR，实验中使用的引物和相应的基因与之对应如下表所示。 结果 内分泌干扰物浓度 PAA和TCM的加入导致处理组中内分泌干扰物浓度升高，但混合暴露组内浓度并未出现叠加效应。具体数据如下： 处理组\t PAA浓度（ng/mL）\t TCM浓度（μg/L） 对照组\t 0\t 0 PAA暴露组\t 100\t 0 TCM暴露组\t 0\t 10 PAA和TCM混合暴露组\t 100\t 10 qPCR分析 分析发现，暴露于PAA和TCM会显著影响稀有鮈鲫脑中机制失活重复1（MCHR1）、雌激素受体α（ERα）和雌激素受体β（ERβ）等基因的表达。具体数据如下： 处理组\t 基因\t 相对表达量（相对对照组） PAA组\t MCHR1\t 0.31 \t ERα\t 0.41 \t ERβ\t 0.28 TCM组\t MCHR1\t 0.21 \t ERα\t 0.12 \t ERβ\t 0.16 PAA和TCM混合组\tMCHR1\t 0.11 \t ERα\t 0.08 \t ERβ\t 0.09 讨论 本研究表明，暴露于PAA和TCM可以影响稀有鮈鲫脑中生殖调控相关基因的表达，进而影响其生殖健康和繁殖能力。这也提示了EDCs对鱼类生殖系统的潜在威胁。值得注意的是，虽然混合暴露组内处理浓度较高，但在MCHR1, ERα和ERβ的表达量上却低于单一暴露组，暗示了不同EDCs之间的相互作用与类似叠加效应不一定相关。此外，这些结果也有助于更深入地探究EDCs对人类和其他生物的影响，提高人们对EDCs的认识和防范意识。