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高通量测序原理第1页/共15页
Solexa技术介绍Solexa 技术最早由两位剑桥大学的化学家创立，利用专利核心技术“DNA 簇” 和“可逆性末端终结”，达成自动化样本制备及基因组数百万个碱基大规模平行测序。第2页/共15页
Solexa 的基本原理第3页/共15页
扩增“桥”结构单链引物第4页/共15页
DNA簇第5页/共15页
单分子克隆~1000 DNA片段per ~ 1 μm “DNA簇” ~1000 “DNA簇” per 100 μm square~40 million clusters per experiment准备DNA片段两端接上 adapters将DNA片段通过adapter锚定在芯片上循环扩增DNA片段成“DNA簇”20 micronsSequence第6页/共15页
检测第7页/共15页
可逆终止反应 Reversible Terminator Chemistry O PPPHNNOO荧光基团3’保护基团Next cycle掺入检测去保护基团 去荧光基团ODNAHNNOO3’O5’游离3‘末端XOH4种标记过的核苷酸第8页/共15页
Sequencing-by-Synthesis (SBS) 5’GTCAGTCAGTCAGT3’5’CAGTCATCACCTAGCGTA 掺入一个碱基Cycle 1: 加入反应体系 移除其他未掺入的核苷酸 信号检测Cycle 2-n: 加入反应体系，循环cycle 11、每轮测序反应加入四种带有荧光标记的dNTP，末端带有可以被去除的保护基团2、每轮反应只能整合一个核苷酸，仪器读取相应的荧光信号3、信号读取结束，用化学方法去除阻断基团和荧光基团，进行下一轮测序反应第9页/共15页
第10页/共15页
123789456T T T T T T T G T …T G C T A C G A T …根据每个DNA簇每轮反应读取的荧光信号序列，转换成相应的DNA序列通过荧光信号分析核苷酸序列第11页/共15页
优缺点高度自动化的系统读取片段多，适合进行大量小片段的测序，如microRNA profiling基于可逆反应，随反应轮数增加，效率降低，信号衰减，读取序列较短，给从头测序（de novo sequencing） 拼接带来困难第12页/共15页
技术特色突出表现 每张测序芯片有8 个通道，每个通道可单独运行一个样品，也可以把多个样品混合在一起检测；一次实验可读取大于15 亿个碱基/芯片；无需建库，自动化样品制备，简单；实验费用低，测序成本为传统测序方法的1/100；样本使用效率极高，所以对少量样本也可以极灵敏精确地检测。第13页/共15页
应用测序与重测序表达谱分析Small RNA鉴定与定量SNP检测DNA甲基化分析第14页/共15页
感谢观看!第15页/共15页
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