第一章细胞培养技术的基本理论知识.pptVIP

第三节　培养细胞的生存环境与条件 １．细胞的营养需要： 　１）基本营养物质： 　　　氨基酸（１２种＋谷氨酰胺） 　　　维生素 　　　葡萄糖、核糖、脱氧核糖等　　　 　　　无机离子等 　２）促细胞生长因子：多由血清提供 　 第三十页，共六十四页，2022年，8月28日 ２．细胞的生存环境 １）温度条件对细胞生长的影响 不同生物来源的组织细胞培养温度不同；体外培养动物细胞最常用的温度是37℃。 耐低温不耐高温！ 培养细胞对低温的耐受力较对高温强；当温度在43℃以上1小时，细胞全部死亡;相反，温度不低于0℃时，对细胞代谢虽有影响，但并无伤害作用。在生理温度范围内，温度与细胞生长率之间存在正相关关系。 第三十一页，共六十四页，2022年，8月28日 ２）气相环境对细胞生长的影响 动物细胞培养的气相环境都是采用5%CO2与95%空气（提供氧）的混合气体。 　Ｏ2参与细胞的能量代谢过程。 　ＣＯ2用于维持培养液的酸碱度。 　 　一般多为开放式培养 第三十二页，共六十四页，2022年，8月28日 3）渗透压 正常渗透压维持细胞张力并调节细胞代谢，一般细胞渗透压为260～320mmol/L。 4）培养液的酸碱度对细胞生长的影响 大多数的有机体细胞能在pH6.0～8.0的环境中生存。最适宜的pH值范围是7.2～7.4。 体外培养的正常细胞耐酸能力要强于耐碱能力 5）无污染、无毒（前提条件！） 第三十三页，共六十四页，2022年，8月28日 3．细胞常用的培养液和试剂 培养用液是维护组织细胞生存、生长及进行细胞培养各项操作过程中所需的基本溶液。 　平衡盐溶液 主要包括　 培养基 　 　　　　　 其他培养用液 　 天然培养基 合成培养基 第三十四页，共六十四页，2022年，8月28日 1）平衡盐溶液(Balanced Salt So1ution：BSS) BSS 又称生理盐水或盐溶液，主要由无机盐和葡萄糖组成。本身具有维持渗透压，调控酸、碱度平衡的作用，同时能供给细胞生存所需的能量和无机离子成分；用作洗涤组织、细胞以及配制各种培养用液的基础溶液。 BSS 内含少量的酚红，作为溶液酸碱度变化的指示剂；溶液变酸时呈黄色，变碱时呈紫红色，中性时呈桃红色，借此易于观察到培养液pH 的变化。 第三十五页，共六十四页，2022年，8月28日 几种常用的平衡盐溶液： Ringer、PBS、Tyrode、Earle、Hank’s、D-Hank’s、Dulbecco（都有相应配方） 最简单的BSS是Ringer。D-Hank’s与Hank’s的一个主要区别在于前者不含有Ca2+、Mg2+ ，因此D-Hank’s常用于配制胰酶溶液。 配制平衡盐溶液也应当用新鲜的三蒸水。配好的平衡盐溶液可以过滤除菌或高温高压灭菌。 有浑浊或沉淀时，应重新配制 第三十六页，共六十四页，2022年，8月28日 PBS（Phosphate-Buffered Sallines） KCl 0.20g KH2PO4 0.20g NaCl 8.00g Na2HPO4·7H2O 2.16g DPBS（Dulbecco’s Phosphate-Buffered Sallines）标准型 CaCl2(anhyd.)(无水氯化钙) 0.10g KCl 0.20g KH2PO4 0.20g MgCl2·6H2O 0.10g NaCl 8.00g Na2HPO4·7H2O 2.16g 第三十七页，共六十四页，2022年，8月28日 D-Hanks’ 平衡盐溶液(D-Hanks Balanced Salt Solutions, D-HBSS) KCl 0.40g KH2PO4 0.06g NaCl 8.00g NaCO3 0.35g Na2HPO4 0.048g D-Glucose 1.00g Phenol Red 0.01g 第三十八页，共六十四页，2022年，8月28日 2）培养基 培养基就是人工模拟细胞在体内生长的营养环境，维持细胞生长的营养物质,它是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。 细胞培养基的基本要求: 体外培养的细胞直接生活在培养基中，因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、渗透压、pH等诸多方面的要求。 培养基可分为天然培养基、合成培养基。 第三十九页，共六十四页，2022年，8月28日 合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。目前已设计出许多种培养基，如MEM、RPMI-1640、 DMEM等。主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。 目前常用的MEM