农业农村部公告第316号-3-2020CN.docx

ICS 65.120 B 46 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 农业农村部公告第316号一3—2020 饲料中泰妙菌素的测定 高效液相色谱法 Determination of tiamulin in feeds— High performance liquid chromatography 2020-07-17发布 2020-11-01 实施 中华人民共和国农业农村部发布 I 农业农村部公告第316号—3—2020 前 言 本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由农业农村部畜牧兽医局提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC 76)归口。 本标准起草单位：江西省兽药饲料监察所、播恩生物技术股份有限公司、赣州朱师傅预混饲料事业有 限公司、江西省动物卫生监督所。 本标准主要起草人：杨琳芬、符金华、吴科盛、徐国茂、夏骏、李勇、韩晓瑛、冯长贵、胡翊炜。 农业农村部公告第316号—3 2020 饲料中泰妙菌素的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中泰妙菌素含量测定的高效液相色谱法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料中泰妙菌素的测定。 本标准配合饲料、浓缩饲料和精料补充料中泰妙菌素的检出限为0.4 mg/kg,定量限为1.0 mg/kg; 添加剂预混合饲料中泰妙菌素的检出限为0.8 mg/kg,定量限为2.0 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规则和试验方法 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 原理 用乙腈提取试样中泰妙菌素，经混合型强阳离子交换固相萃取柱净化，高效液相色谱分离，紫外检测 器测定，外标法定量。 4 试剂或材料 除另有规定外，仅使用分析纯试剂。 4.1 水；GB/T 6682,一级 4.2 乙腈：色谱纯。 4.3 甲醇：色谱纯。 4.4 正丙醇。 4.5 正已烷。 4.6 磷酸盐缓冲溶液I(pH 5.5):准确称量1.420g 无水磷酸氢二钠，加约800mL 水溶解后，用磷酸调 至pH5.5, 用水定容至1000 mL。 4.7 磷酸盐-乙腈溶液：准确量取700 mL 磷酸盐缓冲溶液I(4.6),加入300mL 乙腈混匀。 4.8 磷酸盐缓冲溶液Ⅱ(pH8.0): 准确称量1.420 g 无水磷酸氢二钠，加约800 mL 水溶解后，用磷酸调 至pH8.0, 用水定容至1000 mL。 4.9 氨化乙腈溶液：准确量取3 mL 氨水，用乙腈稀释并定容至100mL。 4.10 泰妙菌素标准储备溶液(1mg/mL): 称取泰妙菌素标准品(分子式：Cz?H?NO?S,CAS 号：55297- 95-5,纯度≥99.8%)10 mg (精确至0.01mg), 用乙腈溶解并定容至10mL。 -20℃ 以下保存，有效期3 个月。 4.11 泰妙菌素标准中间溶液(200 μg/mL): 准确量取适量泰妙菌素标准储备溶液(4.10),用流动相稀释 至200μg/mL。 临用现配。 4.12 泰妙菌素标准系列工作溶液：准确量取适量泰妙菌素标准中间溶液(4.11),用流动相分别配制成 0.5μg/mL、1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL标准工作溶 液。临用现配。 4.13 混合型强阳离子交换固相萃取(MCX) 柱：60mg/3mL, 或与之性能相当者。 4.14 微孔滤膜：孔径0.45 μm, 有机相。 2 农业农村部公告第316号—3—2020 5 仪器设备 5.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管矩阵检测器。 5.2 天平：感量0.1 mg 和感量0.01 mg。 5.3 振荡器：最大转速不低于200 r/min。 5.4 高速冷冻离心机：可控温至4℃,转速不低于10000 r/min。 5.5 涡旋混合器。 5.6 旋转蒸发仪。 5.7 氮吹仪。 6 样品 按GB/T 20195制备样品，至少200 g,粉碎至全部通过0.42 mm 孔径的筛，混匀，装入密闭容器中， 备用。 7 试验步骤 7.1 提取 平行做2份试验。称取试样2g(添加剂预混合饲料称取1 g)(精确至0. 1 mg), 置于50 mL 离心管 中，加入20.0 mL 乙腈，涡旋混匀后，振荡提取10 min,4℃下10000r/mi