DB64 956_2014  葡萄种条病毒检测方法.docx

ICS 65.020 B 16 宁 夏 DB64 回 族 自 治 区 地 方 标 准 DB 64/T 956—2014 葡萄种条病毒检测方法 2014-03-24发布 2014-03-24实施 宁夏回族自治区质量技术监督局 发布 I DB64/ T 956—2014 前 言 本标准的编写格式符合GB/T1.1-2009 《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》的要求。 本标准由宁夏农林科学院、国家葡萄产业技术体系贺兰山东麓综合试验站提出。 本标准由宁夏回族自治区林业局归口。 本标准由宁夏农林科学院植物保护研究所起草。 本标准主要起草人：王国珍、沙月霞、姜彩鸽、张怡、陈卫平、樊仲庆、牛锐敏。 1 DB64/ T 956—2014 葡萄种条病毒检测方法 1 范围 本标准规定了葡萄种条病毒检测方法的术语和定义、检测对象、检测样本的采集方法和检测方法。 本标准适用于葡萄种条病毒的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 NY469 葡萄苗木 NY/T 1843-2010 葡萄无病毒母本树和苗木 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 葡萄种条 用于生产嫁接苗、扦插苗的砧木及接穗品种的一年生枝条。 3.2 检测方法 指示植物、酶联免疫(ELISA)和反转录聚合酶链反应 (RT-PCR)。 4 检测对象 葡萄扇叶病毒 (Grapevine fanleaf virus,GFLV)、 葡萄卷叶病毒1 (Grapevine leafroll associated virus 1,GLRaV-1)、 葡萄卷叶病毒3(Grapevine leafroll associated virus 3,GLRaV-3)、葡萄斑点病毒(Grapevine feck virus,GFkV) 5 检测样本采集方法 5.1 采穗圃内检测样本的采集 2 DB64/ T 956—2014 在葡萄新梢生长期至葡萄成熟期，对采穗圃内品种进行鉴定的同时，定期调查病毒病的发生情况。 选择品种纯正，无病毒发生的植株用红色油漆标记，作为葡萄病毒检测样品。检测样本采集时间和采集 部位见表1。 表1 ELISA 和 RT-PCR 检测适宜时期和取样部位 病毒种类 ELISA检测 RT-PCR检测 适宜时期 取样部位 适宜时期 取样部位 葡萄扇叶病毒(GFLV) 开花期前后 树体上部的嫩叶及种条 韧皮部 开花期前后 树体上部嫩叶及种条 韧皮部 葡萄卷叶病毒1(GLRaV-1) 葡萄卷叶病毒3(GLRaV-3) 果实转色期以后 树体下部叶片或成熟 枝条韧皮部 果实转色期以后 树体下部叶片或成熟 枝条韧皮部 葡萄斑点病毒(GFkV) 开花期前后 嫩叶 休眠期 休眠枝条韧皮部 5.2 外调种条的检测 取种条韧皮部进行病毒检测。 6 检测方法 病毒检测采用指示植物、 ELISA 和RT-PCR 方法。 6.1 指示植物检测方法 6.1.1 GFLV、GLRaV-1、GLRaV-3 和 GFkV 均可采用指示植物进行检测，指示植物有：草本指示植物和 木本指示植物，检测用指示植物和症状表现见表2。 表2 葡萄病毒在指示植物上的症状表现 病毒种类 木本指示植物 草本指示植物 沙地葡萄圣乔治 (Vitis rupestris St.George) 欧洲葡萄 (Vitis vinifera) 普通烟 (LN33) 昆诺阿蔡 (Chenopodium quinoa Willd) 千日红 (Gomphreng globosa) 葡萄扇叶病毒 (GFLV) 叶片出现褪绿斑 点、呈扇形 局部褪绿斑，系 统斑驳，扭曲 局部红色坏死 斑，系统褪绿， 扭 曲 。 葡萄卷叶病毒 (GLRaV-1) 叶向背卷，脉间 产生红色斑块。 葡萄卷叶病毒3 (GLRaV-3) 叶向背卷，叶色紫 红，叶脉仍绿。 叶向背卷，脉间 产生红色斑块。 3 DB64/ T 956—2014 表 2 ( 续 ) 病毒种类 木本指示植物 草本指示植物 沙地葡萄圣乔治 (Vitis rupestris St.George) 欧洲葡萄 (Vitis vinifera) 普通烟 (LN33) 昆诺阿藜 (Chenopodium quinoa Willd) 千日红 (Gomphrena globosa) 葡萄斑点病毒 (GFkV) 早春、初夏叶片有 透明黄斑，夏季症 状不明显。 注：1)指红色品种，常用的有品丽珠(Cabernet franc)、赤霞珠(Cabernet sauvingnon)、黑比诺(P