基因工程的原理和技术.pptxVIP

第1页/共12页基因工程的原理和技术第2页/共12页第3页/共12页基因工程的基本操作步骤1）获取目的基因2）形成重组DNA分子3）将重组DNA分子导入受体细胞4）筛选含有目的基因的受体细胞5）目的基因的表达第4页/共12页一、获得目的基因目的基因就是人们所需要的基因。获取方法1、化学方法合成2、利用PCR技术扩增目的基因3、从基因文库中获取目的基因第5页/共12页变性延伸退火循环PCR技术第6页/共12页反转录限制性核酸内切酶与载体连接 导入与载体连接 导入基因文库:将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。某种生物某个时期的mRNA某生物体内全部DNA 许多DNA片段cDNA受体菌群体受体菌群体部分基因文库（cDNA文库）基因组文库第7页/共12页二、形成重组ＤＮＡ分子1）用一定的限制性核酸内切酶切割质粒，使其出现一个切口，露出粘性末端。2）用同一种限制性核酸内切酶切断目的基因，使其产生相同的粘性末端。3）用DNA连接酶将切下的目的基因片段和载体ＤＮＡ形成了一个重组DNA分子（重组质粒）第8页/共12页三、目的基因导入受体细胞常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。将目的基因导入受体细胞的原理借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。第9页/共12页三、目的基因导入受体细胞例如，用质粒作为载体，宿主细胞应该选择大肠杆菌。 1）将细菌用CaCl2处理，以增大细菌细胞壁的通透性。 2）使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。 3）目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。第10页/共12页氨苄青霉素抗性基因四环素抗性基因四、筛选含有目的基因的受体细胞第11页/共12页五、目的基因的表达受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。若不能表达，要对抗虫基因再进行修饰。第12页/共12页感谢观看！