兽医微生物学课件-疫血清学技术.pptVIP

双抗散主要用于抗原的比较和鉴定，两个相邻的抗原孔 (槽)与其相对的抗体孔之间，各自形成自己的沉淀带。沉淀带的基本形式有以下三种。 二相邻孔为同一抗原时，两条沉淀带完全融合 二者在分子结构上有部分相同抗原决定簇，则两条沉淀带不完全融合并出现一个叉角。 两种完全不同的抗原，则形成两条交叉的沉淀带 不同分子的抗原抗体系统可各自形成两条或更多的沉淀带 双扩散也可用于抗体的检测，测抗体时，加待检血清的相邻孔应加入标准阳性血清作为对照，以资比较。 抗体效价：测定抗体时可倍比稀释血清，以出现沉淀带的血清最大稀释度为抗体效价。 2、单向扩散 又称辐射扩散 试验在玻璃板或平皿上进行，用1.6%～2.0%琼脂加一定浓度的等量抗血清浇成凝胶板，厚度为2～3mm，在其上打直径为2mm的小孔，孔内滴加抗原液。抗原在孔内向四周辐射扩散，与凝胶中的抗体接触形成白色沉淀环。此白色沉淀环随扩散时间而增大，直至平衡为止。沉淀环面积与抗原浓度呈正比，因此可用已知浓度的抗原制成标准曲线，即可用以测定抗原的量。 此法在兽医临床已用于传染病的诊断，如鸡马立克病的诊断，可将鸡马立克高病毒免血清浇成血清琼脂平板，拔取病鸡新换的羽毛数根，将毛根剪下，插于此血清平板上，阳性者毛囊中病毒抗原向四周扩散，形成白色沉淀环。 （三）免疫电泳技术 免疫电泳技术由琼脂双扩散与琼脂电泳技术结合而成。免疫电泳技术包括： 免疫电泳、 对流免疫电泳、 火箭免疫电泳等技术。 1、免疫电泳 （1）基本原理 带电的胶体颗粒在电场的作用下，定向移动的现象称为电泳。蛋白质分子为一种两性电解质。在一定的pH下，其所带的正负电荷相等，叫做等电点。等电点时蛋白质在电场中不移动。当电泳所用缓冲液的pH小于蛋白质的等电点时，蛋白质的氨基电离带正电荷向负极泳动，当pH大于等电点时，蛋白质的羧基电离带负电荷向正极泳动。 一般电泳所用缓冲液的pH偏于蛋白质等电点的碱侧，故蛋白质带负电荷，在电场作用下向正极泳动。 （2）影响因素 泳动的速度和距离与蛋白质所带负电荷量、电场强度、介质的性质、粘度及温度，以及缓冲液的种类、pH、离子强度、电渗等因素有关。如蛋白质所带的电荷量多，电场强度大，介质的粒度小、吸附性小，缓冲液的离子强度较低，pH偏离蛋白质等电点较远，琼脂的电渗作用较小，则泳动速度快，反之则慢。 （3）电渗流 由于电泳时所用支持物，一些极性集团也带有负电荷，但固相部分不能移动，而与琼脂相接触的液体相则带正电荷，可向负极移动，造成电渗流。此时蛋白质分子电泳的表面速度，实际上是其本身向正极移动的电泳速度与电渗作用之差值。 （4）流程 一混合物中各组分在电泳后，便可依其电泳力与电渗力的不同，而形成不同的区带，使各组分分布于支持物的不同位置上。 再加入相应抗血清免疫扩散 在最适比例处形成数条沉淀弧线。每一条沉淀弧线，即代表一对抗原、抗体反应。并由于抗原 (混合物中各组分)向四周扩散，而抗体则为垂直扩散;故沉淀弧线呈弯曲弧型。 2、对流免疫电泳 在加有抗原、抗体的琼脂凝胶中，通电电泳时，出现抗原、抗体向相反方向泳动的现象，称为对流免疫电泳。 （1）基本原理 抗原、抗体由于等电点不同，在pH偏碱性的环境中，所带负电荷也有差异。抗原所带负电荷多，在电泳时向正极泳动，而抗体则接近其等电点，所带负电荷少，又加琼脂的电渗作用，故电泳时，抗体向负极移动。如二者相对应时，即可在相遇的最适比例处形成一条白色沉淀线。 （2）流程 制板 打孔 加样（于负极端孔中加入抗原，正极端孔中加入抗血清 ） 电泳（1小时） （3）火箭电泳 在电场作用下，抗原在含定量抗体的离子琼脂中泳动后，如二者比例合适时，可在短时间内出现锥形的沉淀峰，形似火箭状，故又称为火箭电泳。此沉淀峰的高度与抗原的浓度成正比，与抗体的浓度成反比。单向琼脂免疫电泳技术常用于检测标本中的免疫球蛋白含量。 烟草花叶病毒火箭电泳图 第三节 补体参与的试验 第四节 中和试验 根据抗体能否中和病毒的感染性而建立的免疫学试验称为中和试验。中和试验极为特异和敏感，主要用于病毒感染的血清学诊断、病毒分离株的鉴定、不同病毒株的抗原关系研究、疫苗免疫原性的评价、免疫血清的质量评价和测定动物血清抗体的检测等。 * 细胞病变效应：病毒在细胞内增殖，可引起不同的结果，有的细胞完全被破坏，有的只有轻微的病变，或无可见的变化，由病毒引起的细胞病变，称CPE。往往随病毒种类和细胞类型不同而异。这些变化在一定条件下比较恒定。常见的为细胞变圆，坏死，溶解或脱落等。腺病毒 细胞变圆，并堆积成葡萄状，